Revision 6

#18350Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) (D6M4W) Rabbit mAb 44463 20 µl 110-130, 125-140, 180-200 kDa Rabbit IgG
Phospho-Axl (Tyr702) (D12B2) Rabbit mAb 5724 20 µl 138 kDa Rabbit IgG
Axl (C89E7) Rabbit mAb 8661 20 µl 138 kDa Rabbit IgG
Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb 4319 20 µl 210 kDa Rabbit IgG
Tyro3 (D38C6) Rabbit mAb 5585 20 µl 110, 130 kDa Rabbit IgG
GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb 67202 20 µl 78 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of TAM family members using phospho-specific and control antibodies. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Axl, Mer and Tyro3 are three members of the TAM family receptor tyrosine kinase that share a common NCAM (neural adhesion molecule)-related extracellular domain and a conserved intracellular tyrosine kinase domain. These receptors bind common homologous vitamin K dependent protein GAS6 and protein S to activate downstream signaling pathways (1). TAM family receptors are involved in the development of immune, nervous, vascular and reproductive systems, autoimmune disease, cancer drug resistance and tumor immunity response (2-5). Axl (Tyr698), Axl (Tyr702), Mer Tyr(749) and Tyro3 (Tyr681) are conserved autophosphorylation sites located in the activation loop of the respective tyrosine kinase domains. Phosphorylation at these sites is required for full kinase activation of each of the corresponding receptors (6,7).

  1. Rothlin, C.V. et al. (2015) Annu Rev Immunol 33, 355-91.
  2. Burstyn-Cohen, T. (2017) Int J Dev Biol 61, 215-24.
  3. Bellan, M. et al. (2016) Int J Mol Sci 17, pii: E1807.
  4. Schoumacher, M. and Burbridge, M. (2017) Curr Oncol Rep 19, 19.
  5. Akalu, Y.T. et al. (2017) Immunol Rev 276, 165-77.
  6. Ling, L. et al. (1996) J Biol Chem 271, 18355-62.
  7. Onken, J. et al. (2017) Oncotarget 8, 50403-14.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Revision 6
    #18350

    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit

    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 MCF7 细胞(蓝色)和 HepG2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb 对 SK-MEL-5、Hep G2 和 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) (D6M4W) 兔单抗(上图)和 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661(下 1 图)、Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb #4319(下图 2)和 Tyro3 (D38C6) Rabbit mAb #5585(下图 3)对来自未经处理 (-) 或经过 GAS6 (400 ng/ml) 和 H2O2 (4 mM) 处理10 分钟的 NCI-H1299 和 SK-MEL-5 细胞的提取物进行的蛋白质印迹法分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Tyro3 (D38C6) Rabbit mAb 对 COS-7 细胞和来自人和小鼠脑组织的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-c-Axl (Tyr702) (D12B2) Rabbit mAb (上图) 或 Axl (C44G1) Rabbit mAb #4566(下图),对未经处理 (-) 或已经 Gas6 (100 ng/ml,10分钟) 处理的 NCI-H1299 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或 Axl 敲除型 (+) HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb(绿色)对 SK-MEL-5 细胞(左)、Hep G2 细胞(中)和 MCF7 细胞(右)进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ® #4084(DNA 荧光染料)。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    对来自经 GAS6 (400 ng/ml) 和 H2O2 (4 mM) 处理 10 分钟的 NCI-H1299 细胞的 Phospho-Axl (Tyr698) 蛋白进行的免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入,通道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 是 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb,泳道 4 是 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661。使用 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb(上图)和 Axl (C89E7) Rabbit mAb #8661(下图)进行蛋白质印迹法分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对来自经 GAS6 (400 ng/ml) 和 H2O2 (4 mM) 处理 10 分钟的 SK-MEL-5 细胞的 Phospho-Mer (Tyr749) 蛋白进行的免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入,通道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3是 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb,泳道 4是Mer(D21F11) XP® Rabbit mAb #4319。使用 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb(上图)和 Mer (D21F11) XP® Rabbit mAb #4319(下图)进行蛋白质印迹法分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 using GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 NCI-H226 细胞沉淀物(左图,阳性)和 HT29 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。注意浸润细胞的染色。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    对来自经 GAS6 (400 ng/ml) 和 H2O2 (4 mM) 处理 10 分钟的 SK-MEL-5 细胞的 Phospho-Tyro3 (Tyr681) 蛋白进行的免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入,通道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3是 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb,泳道 4是 Tyro 3 (D38C6) Rabbit mAb #5585。使用 Phospho-Axl (Tyr698)/Mer (Tyr749)/Tyro3 (Tyr681) Rabbit mAb(上图)和Tyro3 (D38C6) Rabbit mAb #5585(下图)进行蛋白质印迹法分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 GAS6 (D3A3G) Rabbit mAb(绿色)对 NCI-H226(左图,阳性)和 HT-29(右图,阴性)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的转移性肺癌进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的细胞沉淀物 NCI-H1299(左)或 Jurkat(右)进行免疫组织化学分析。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Axl (C89E7) Rabbit mAb(绿色)对 DU 145(左)和 HCC827(右)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Tyro/Axl/Mer Activation Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Axl (C89E7H4) Rabbit mAb 对固定和透化的 Jurkat 细胞(蓝色,阴性)和 DU145 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞术分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。