Revision 1

#9382Store at -20C

 

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Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb 3165 40 µl 70 kDa Rabbit IgG
Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) (65E4) Rabbit mAb 2717 40 µl 70, 72 kDa Rabbit IgG
SLP-76 Antibody 4958 40 µl 76 kDa Rabbit 
Phospho-LAT (Tyr220) Antibody 3584 40 µl 36, 38 kDa Rabbit 
LAT Antibody 9166 40 µl 36, 38 kDa Rabbit 
Phospho-Lck (Tyr505) Antibody 2751 40 µl 56 kDa Rabbit 
Lck (73A5) Rabbit mAb 2787 40 µl 56 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The T Cell Signaling Antibody Sampler Kit contains primary and secondary antibodies to perform four Western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The Syk family protein tyrosine kinase Zap-70 is expressed in T and NK cells and plays a critical role in mediating T cell activation in response to T cell receptor (TCR) engagement (1). Following TCR engagement, Zap-70 is rapidly phosphorylated on several tyrosine residues through autophosphorylation and transphosphorylation by the Src family tyrosine kinase Lck (2-6). Tyrosine phosphorylation correlates with increased Zap-70 kinase activity and downstream signaling events. Expression of Zap-70 is correlated with disease progression and survival in patients with chronic lymphocytic leukemia (7,8).
LAT, a transmembrane adaptor protein expressed in T, NK and mast cells, is an important mediator for T cell receptor (TCR) signaling (9). Upon TCR engagement, activated Zap-70 phosphorylates LAT at multiple conserved tyrosine residues within SH2 binding motifs, exposing these motifs as the docking sites for downstream signaling targets (10,11). The phosphorylation of LAT at Tyr171 and 191 enables the binding of Grb2, Gads/SLP-76, PLCgamma1 and PI3 kinase through their SH2 domain and translocates them to the membrane. This process eventually leads to activation of the corresponding signaling pathways (11-12).

  1. Chu, D.H. et al. (1998) Immunol Rev 165, 167-80.
  2. Iwashima, M. et al. (1994) Science 263, 1136-9.
  3. Neumeister, E.N. et al. (1995) Mol Cell Biol 15, 3171-8.
  4. Chan, A.C. et al. (1995) EMBO J 14, 2499-508.
  5. Williams, B.L. et al. (1999) EMBO J 18, 1832-44.
  6. Di Bartolo, V. et al. (1999) J Biol Chem 274, 6285-94.
  7. Wiestner, A. et al. (2003) Blood 101, 4944-51.
  8. Crespo, M. et al. (2003) N Engl J Med 348, 1764-75.
  9. Wonerow, P. and Watson, S.P. (2001) Oncogene 20, 6273-83.
  10. Zhang, W. et al. (1998) Cell 92, 83-92.
  11. Paz, P.E. et al. (2001) Biochem J 356, 461-71.
  12. Zhang, W. et al. (2000) J Biol Chem 275, 23355-61.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9382

    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit

    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.01 mg/mL) from Jurkat cells using Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb #3165. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) (65E4) Rabbit mAb 对已经过氧化氢(2mM,2 分钟)或 λ 磷酸酶处理的 Jurkat 细胞的提取物以及已经抗人 IgM(12 mcg/ml,2 分钟)处理的 Ramos 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Lck (Tyr505) Antibody(上)或对照 Lck Antibody #2752(下),对经小牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 或 H2O2 处理 (2 mM) 的 Jurkat 细胞(饥饿 16 小时)提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Lck (73A5) Rabbit mAb 对 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb 对 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-LAT (Tyr220) Antibody 对未经处理或隔夜血清饥饿后经抗 CD3 处理 (10 µg/ml,2分钟)的人 Jurkat 细胞的 SDS 提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 SLP-76 Antibody 对 Jurkat 和 BW5147 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 LAT Antibody 对未经处理或经 λ 磷酸酶处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) (65E4) Rabbit mAb(绿色)对未经处理(右图)或已经人 IgM(左图)处理的 Ramos 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。红色 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Lck (73A5) Rabbit mAb(红色)和 CD3 Antibody(绿色)对 Jurkat 细胞核进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    对 Jurkat 细胞提取物 Zap-70 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb。使用 Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 LAT Antibody 对石蜡包埋的 Jurkat 细胞进行免疫组织化学分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) (65E4) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色)或已经过抗 IgM(12 ug/ml,2 分钟;绿色)处理的 Ramos 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 Lck (73A5) Rabbit mAb(蓝色),对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 LAT Antibody 对石蜡包埋的扁桃体进行免疫组织化学分析,显示其定位于膜。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb3165(绿色)对 Jurkat 细胞(左图)和 Ramos 细胞(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用与非特异性阴性对照抗体(红色)相对比的 LAT Antibody(蓝色),对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    T Cell Signaling Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(左图)作为对照,使用 Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb(右图)和共染色的 CD3 (UCHT1) Mouse mAb (APC Conjugate) #19881 对人外周血单核细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。