Revision 8
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IHC-P, IF-IC, FC-FP, ChIP, ChIP-seq, C&R

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

58-68

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9UL17

Entrez-Gene Id:

30009

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP and ChIP-seq results, use 10 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

The CUT&RUN dilution was determined using CUT&RUN Assay Kit #86652.
Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:1600
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:400
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:100 - 1:400
Chromatin IP 1:50
Chromatin IP-seq 1:50
CUT&RUN 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #27112.

Specificity / Sensitivity

T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total T-bet/TBX21 protein.

Species Reactivity:

Human

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Gly465 of human T-bet/TBX21 protein.

Background

The T-box gene family consists of transcription factors characterized by a related DNA-binding domain (T-box) of approximately 200 amino acids (1,2). The T-box genes exhibit diverse temporal and spatial patterns in the developing embryo. Studies have demonstrated members of this family play crucial roles during embryogenesis in a wide range of organisms by regulating cell fate decisions to establish the early body plan and to regulate later processes underlying organogenesis (3-5). Mutations in T-box genes are associated with many developmental defects (6). Recent studies also indicate potential roles in cancer by members of the T-box family (7-9).

T-bet, also as known as TBX21, plays a critical role in development and maintenance of type 1 helper T (Th1) and T-bet deficient mice display impaired Th1 differentiation (10,11).

  1. Wilkinson, D.G. et al. (1990) Nature 343, 657-9.
  2. Papaioannou, V.E. and Silver, L.M. (1998) Bioessays 20, 9-19.
  3. Showell, C. et al. (2004) Dev Dyn 229, 201-18.
  4. Papaioannou, V.E. (2001) Int Rev Cytol 207, 1-70.
  5. Hoogaars, W.M. et al. (2007) Cell Mol Life Sci 64, 646-60.
  6. Baldini, A. (2004) Curr Opin Cardiol 19, 201-4.
  7. Abrahams, A. et al. (2010) IUBMB Life 62, 92-102.
  8. Rowley, M. et al. (2004) J Mammary Gland Biol Neoplasia 9, 109-18.
  9. Yang, X.R. et al. (2009) Nat Genet 41, 1176-8.
  10. Ho, I.C. and Glimcher, L.H. (2002) Cell 109 Suppl, S109-20.
  11. Peng, S.L. (2006) Cell Mol Immunol 3, 87-95.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) ChIP: Chromatin IP ChIP-seq: Chromatin IP-seq C&R: CUT&RUN

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

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Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
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Revision 8
#13232

T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb(上图)与 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对 NK-92 和 K-562 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
No image available
Immunohistochemistry Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 MJ [G11] 细胞沉淀物(左图,阳性)或 K-562 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金 B细胞淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
在对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)存在的情况下,使用T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人扁桃体组织进行免疫组织化学分析。
Immunofluorescence Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 XP® (D6N8B) Rabbit mAb(绿色)对 NK-92(阳性,左图)和 K-562 (阴性,右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Flow Cytometry Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 与 CD56、CD3 或 CD19 进行共染色,对人 PBMCs 进行流式细胞分析。CD56+ NK 细胞和部分 CD3+ T 淋巴细胞对 T-bet/TBX21 均为明显阳性,而 CD19+ B 细胞为阴性。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 用作 T-Bet/TBX21 primary 的二抗。
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 NK-92 细胞中提取的交联染色质,在加入 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。本图显示在 CCL4(T-bet/TBX21 的一个已知靶标基因)内的结合作用(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
Chromatin Immunoprecipitation Image 2: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,在加入 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP4®10 Rabbit mAb 后,对 x 6 NK-92 细胞中的交联染色质进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在染色体 17(上图)内的结合,包括 T-bet/TBX21 的已知靶标基因 CCL4(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
Chromatin Immunoprecipitation Image 3: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对 NK-92 细胞中提取的交联染色质,在加入 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 Human CCL4 Promoter Primers、SimpleChIP® Human IFN-γ Promoter Primers #13051 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
CUT and RUN Image 1: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NK-92 细胞和 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了 T-bet 的已知靶标基因 CKS1B 基因内的结合(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
CUT and RUN Image 2: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NK-92 细胞和 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在染色体 1(上图)内的结合,包括 T-bet 的已知靶标基因 CKS1B 基因(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
CUT and RUN Image 3: T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NK-92 细胞和 T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 检测。使用人 GTPbP8 内含子 1 引物、人 CKS1B 外显子 1 引物和人 KC6 上游引物,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。