Revision 6

#72604Store at -20C

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP, IF-IC, FC-FP, ChIP, ChIP-seq, C&R

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

97, 113

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P52630

Entrez-Gene Id:

6773

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP and ChIP-seq results, use 10 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

The CUT&RUN dilution was determined using CUT&RUN Assay Kit #86652.
Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:100 - 1:400
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50 - 1:200
Chromatin IP 1:50
Chromatin IP-seq 1:50
CUT&RUN 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #19413.

Specificity / Sensitivity

Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total Stat2 protein.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Leu706 of human Stat2 protein.

Background

Stat2 (113 kDa), originally purified from the nuclei of alpha-interferon-treated cells, is critical to the transcriptional responses induced by type I interferons, IFN-alpha/beta (1,2). Knockout mice with a targeted disruption of Stat2 have higher susceptibility to viral infection and altered responses to type I interferons (3). Stat2 is rapidly activated by phosphorylation at Tyr690 in response to stimulation by IFN-alpha/beta via associations with receptor-bound Jak kinases (4). Unlike other Stat proteins, Stat2 does not form homodimers. Instead, activated Stat2 forms a heterodimer with Stat1 and translocates to the nucleus. There, it associates with the DNA-binding protein p48 and forms the transcriptional activator complex, interferon-stimulated gene factor 3 (ISGF3), promoting transcription from the ISRE (5).

  1. Fu, X.Y. et al. (1992) Proc Natl Acad Sci U S A 89, 7840-3.
  2. Ihle, J.N. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 211-7.
  3. Park, C. et al. (2000) Immunity 13, 795-804.
  4. Improta, T. et al. (1994) Proc Natl Acad Sci U S A 91, 4776-80.
  5. Horvath, C.M. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 6957-64.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) ChIP: Chromatin IP ChIP-seq: Chromatin IP-seq C&R: CUT&RUN

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
Alexa Fluor is a registered trademark of Life Technologies Corporation.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

限制使用

除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

Revision 6
#72604

Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。
Immunoprecipitation Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
对 KARPAS-299 细胞提取物中的 Stat2 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb。使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。KARPAS 细胞系来源:University of Cambridge 的 Abraham Karpas 博士。
Immunofluorescence Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb(绿色),对血清饥饿(左图)或经 IFNα 处理(#1000,30 ng/mL,分钟;右图)的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Flow Cytometry Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb(实线)对 K-562 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对经人源干扰素-α (IFN-α) #9906 (10nM) 处理 30 分钟的 U266 细胞的交联染色质和 Stat2 (D9J7L) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 Stat2 的已知靶基因 USP18 内结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
Chromatin Immunoprecipitation Image 2: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对经人源干扰素-α (IFN-α) #9906 (10nM) 处理 30 分钟的 U266 细胞的交联染色质和 Stat2 (D9J7L) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 22(上图)内的结合,包括 Stat2 的已知靶标基因 USP18(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
Chromatin Immunoprecipitation Image 3: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 Human Interferon-α (IFN-α) #9906 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 U266 细胞中提取的交联染色质,在加入Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human USP18 promoter primers、SimpleChIP® Human WARS Intron 1 Primers #30101 以及 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
CUT and RUN Image 1: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8927(10nM,30 分钟)处理的 U266 细胞和 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在 GAS5 基因内结合。
CUT and RUN Image 2: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8927(10nM,30 分钟)处理的 U266 细胞和 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在染色体 1(上图)内的结合,包括 GAS5 基因(下图)。
CUT and RUN Image 3: Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927(10nM,30min)处理的 U266 细胞和 Stat2 (D9J7L) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用人 SIN3A 启动子引物和人 ITM2A 上游引物通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。