Revision 1

#9939Store at -20C

1 个试剂盒

(4 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Stat1 Antibody 9172 20 µl 84, 91 kDa Rabbit 
Stat3 (79D7) Rabbit mAb 4904 20 µl 79, 86 kDa Rabbit IgG
Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 94205 20 µl 90 kDa Rabbit IgG
Stat6 (D3H4) Rabbit mAb 5397 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Stat Antibody Sampler Kit provides an economical means to examine multiple Stat proteins: Stat1, Stat3, Stat5 and Stat6. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Jaks (Janus Kinases) and Stats (Signal Transducers and Activators of Transcription) are utilized by receptors for a wide variety of ligands including cytokines, hormones, growth factors and neurotransmitters. Jaks, activated via autophosphorylation following ligand-induced receptor aggregation, phosphorylate tyrosine residues on associated receptors, Stat molecules and other downstream signaling proteins (1,2). The phosphorylation of Stat proteins at conserved tyrosine residues activates SH2-mediated dimerization followed rapidly by nuclear translocation. Stat dimers bind to IRE (interferon response element) and GAS (gamma interferon-activated sequence) DNA elements, resulting in the transcriptional regulation of downstream genes (1,2). The remarkable range and specificity of responses regulated by the Stats is determined in part by the tissue-specific expression of different cytokine receptors, Jaks and Stats (2,3), and by the combinatorial coupling of various Stat members to different receptors. Serine phosphorylation in the carboxy-terminal transcriptional activation domain has been shown to regulate the function of Stat1, -2, -3, -4 and -5 (1). Phosphorylation of Stat3 at Ser727 via MAPK or mTOR pathways is required for optimal transcriptional activation in response to growth factors and cytokines including IFN-gamma and CNTF (4,5). Jak/Stat pathways also play important roles in oncogenesis, tumor progression, angiogenesis, cell motility, immune responses and stem cell differentiation (6-11).

  1. Darnell Jr., J. et al. (1994) Science 264, 1415-1421.
  2. Leonard, W.J. and O'Shea, J.J. (1998) Annu. Rev. Immunol. 16, 293-322.
  3. Caldenhoven, E. et al. (1996) J. Biol. Chem. 271, 13221-13227.
  4. Wen, Z. et al. (1995) Cell 82, 241-250.
  5. Yokogami, K. et al. (2000) Curr. Biol. 10, 47-50.
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  9. Dentelli, P. et al. (1999) J. Immunol. 163, 2151-2159.
  10. Cattaneo, E. et al. (1999) Trends Neurosci. 22, 365-369.
  11. Frank, D.A. (1999) Mol. Med. 5, 432-456.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9939

    Stat Antibody Sampler Kit

    Stat Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image

    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from Jurkat cells using Stat6 (D3H4) Rabbit mAb #5397. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12 – 230 kDa separation module.

    Stat Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb #94205 对 HDLM-2 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb #94205 对 HDLM-2 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Stat3 (79D7) Rabbit mAb #4904和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125,对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® Stat3 siRNA I (+) 或 SignalSilence® Stat3 siRNA II #6582 (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Stat3 (79D7) Rabbit mAb 可确认 Stat3 表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用于观察上样量和 Stat3 siRNA 的特异性。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Stat6 (D3H4) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Stat1 Antibody #9172(上图)和 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对 A549 细胞(泳道 1)或 STAT1 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。STAT1 敲除型 A549 细胞中没有信号,这证实了抗体对 STAT1 的特异性。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb (上图) 与 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图),对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Stat3 (79D7) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对饥饿过夜后用 IL-4(100 ng/ml;30 分钟)处理的 Ramos 细胞中提取的交联染色质,在加入 Stat6 (D3H4) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human DMD Intron 2 Primers #7710、human MS4A1 promoter primers 以及 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    在转染空载、转染非靶向(对照)siRNA 或转染 Stat1 siRNA48 小时后,对 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。使用 Stat1 Antibody #9172 检测Stat1,使用 p42 MAPK Antibody #9108 检测 p42。Stat1 Antibody 可确认 Stat1 表达沉默,而 p42 MAPK Antibody 可用作蛋白上样和 siRNA 特异性对照。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染人全长 Stat5a (+) 或 Stat5b (+) 表达载体的 PC-3 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) Antibody #9171(上图)或 Stat1 Antibody(下图),对未经处理的或经 IFN-α 处理 (100 ng/ml) 的 SK-MEL-28 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对 K-562 细胞提取物Stat5 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input,泳道 2 经 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb。使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 IL-6 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质,在加入 Stat3 (79D7) Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 IFN-γ (50 ng/ml) 处理 30 分钟后的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质,在加入 Stat1 Antibody 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Stat Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对经 IL-3 饥饿处理 6 小时后以 IL-3 诱导 45 分钟的 BaF3 细胞的交联染色质和 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Mouse CIS Intron 1 Primers #5131、mouse SOCS-3 promoter primers 和 SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers #7015,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。