Revision 2
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 5339 100 µl H M R Mk 60 Rabbit IgG
Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb 18338 100 µl H M R 60 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Members of the SMAD family of signal transduction molecules are components of a critical intracellular pathway that transmit TGF-β signals from the cell surface into the nucleus. Three distinct classes of SMADs have been defined: the receptor-regulated SMADs (R-SMADs), which include SMAD1, 2, 3, 5, and 9; the common-mediator SMAD (co-SMAD), SMAD4; and the antagonistic or inhibitory SMADs (I-SMADs), SMAD6 and 7 (1-5). Activated type I receptors associate with specific R-SMADs and phosphorylate them on a conserved carboxy-terminal SSXS motif. The phosphorylated R-SMADs dissociate from the receptor and form a heteromeric complex with SMAD4, initiating translocation of the heteromeric SMAD complex to the nucleus. Once in the nucleus, SMADs recruit a variety of DNA binding proteins that function to regulate transcriptional activity (6-8).

  1. Heldin, C.H. et al. (1997) Nature 390, 465-71.
  2. Attisano, L. and Wrana, J.L. (1998) Curr Opin Cell Biol 10, 188-94.
  3. Derynck, R. et al. (1998) Cell 95, 737-40.
  4. Massagué, J. (1998) Annu Rev Biochem 67, 753-91.
  5. Whitman, M. (1998) Genes Dev 12, 2445-62.
  6. Wrana, J.L. (2000) Sci STKE 2000, re1.
  7. Attisano, L. and Wrana, J.L. (2002) Science 296, 1646-7.
  8. Moustakas, A. et al. (2001) J Cell Sci 114, 4359-69.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    Revision 2
    #11958

    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet

    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb(上图)和总 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339(下图)对未经 (-) 或经 Human Transforming Growth Factor β3 (hTGF-β3)#8425(100 ng/ml,30 分钟)(+) 处理的 HaCaT 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HeLa 细胞(泳道 1)或 SMAD2 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。SMAD2 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 SMAD2 的特异性。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    对经 Human Transforming Growth Factor β1 (hTGF-β1) #8915(10 nM,30 分钟)处理的 HaCaT 细胞的提取物磷酸化 SMAD2 (Ser465/Ser467) 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb。使用 P-SMAD2 (Ser465/ Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用于检测,以避免与 IgG 具有的交叉反应性。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-Smad2 (Ser465/467) (E8F3R) Rabbit mAb(绿色)对未处理的(左图)、经 Human Transforming Growth Factor β3 (hTGF-β3) #8425(100 ng/mL,20 分钟;中间)处理,或经 hTGF-β3 处理后用 λ 磷酸酶处理(右图)的血清饥饿 HT-1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb(绿色)对血清饥饿(左图)或已经 hTGF-β3 #8425 处理(右图)的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Smad2 (Ser465/467) (E8F3R) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未处理的(蓝色)、经 Human Transforming Growth Factor β3 (hTGF-β3) #8425(100 ng/mL,30 分钟;绿色)处理,或经 SB43152(10 ug/mL,30 分钟)预处理后再用 hTGF-β3(100 ng/mL,30 分钟;红色)处理的血清饥饿 HT-1080 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb(实线)对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经 Human Growth Factor β1 #8915(7 ng/ml,1 小时)处理的 HaCaT 细胞的交联染色质与 Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、Human JunB Promoter Primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    PhosphoPlus® SMAD2 (Ser465/467) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对已经 Human TGF-β 3 #8425 (7 ng/ml,1 小时)处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质,在加入 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。