Revision 3

#12747Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb 3108 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 5339 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 8685 20 µl 52, 60 kDa Rabbit IgG
Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb 9520 20 µl 52 kDa Rabbit IgG
SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 9523 20 µl 52 kDa Rabbit IgG
SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 38454 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The SMAD2/3 Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting target proteins of the TGF-β signaling pathway. The kit includes enough antibody to perform two western blots with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Transforming growth factor-β (TGF-β) superfamily signaling plays a critical role in the regulation of cell growth, differentiation, and development in a wide range of biological systems. In general, signaling is initiated with ligand-induced oligomerization of serine/ threonine receptor kinases and phosphorylation of the cytoplasmic signaling molecules Smad2 and Smad3 for the TGF-β/activin pathway, or Smad1/5/8 for the bone morphogenetic protein (BMP) pathway. Carboxy-terminal phosphorylation of Smad proteins by activated receptors results in their partnering with the common signaling transducer Smad4, and translocation to the nucleus. Activated Smad proteins regulate diverse biological effects by partnering with transcription factors resulting in cell-state specific modulation of transcription (1-4).

  1. Horbelt, D. et al. (2012) Int J Biochem Cell Biol 44, 469-74.
  2. Ikushima, H. and Miyazono, K. (2010) Nat Rev Cancer 10, 415-24.
  3. Kitisin, K. et al. (2007) Sci STKE 2007, cm1.
  4. Schmierer, B. and Hill, C.S. (2007) Nat Rev Mol Cell Biol 8, 970-82.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 3
    #12747

    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit

    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb #3108 对经 hTGF-β3（10 ng/mL，30 分钟）处理的血清饥饿 HT-1080 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520 对经 hTGF-β3（10 ng/mL，30 分钟）处理的血清饥饿的 HT1080 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道视图（左图）显示一抗稀释比例为 1:250 时的靶标条带（如图所示）。相应的电泳图视图（右图）描绘了一抗稀释比例为 1:250 时（灰色线）沿毛细血管的按分子量的化学发光。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb（上图）或 SMAD2 Antibody #3102（下图），对未经处理或经 TGF-β 处理的 HeLa 细胞和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。HT-29 和 COLO 205 是确认抗体特异性的 SMAD4 无效型突变细胞系。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339（上图）和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对 HeLa 细胞（泳道 1）或 SMAD2 敲除型细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。SMAD2 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 SMAD2 的特异性。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 对来自 HeLa 细胞和 ACHN 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520（上图）或总的 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（下图），对未经处理 (-) 或经 TGF-β（10 ng/ml，30 分钟；+）处理的 HT-1080 细胞 、C2C12 细胞或 KNRK 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（上图）或 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自对照 Hela 细胞（泳道 1）或在 SMAD3 编码基因中有明显符合可读框截短突变的 Hela 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。突变 HeLa 细胞中 SMAD3 分子量的变化与框内缺失一致。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    对 HCT 116 细胞提取物的 SMAD4 蛋白进行免疫。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb。使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    对 HCT116 细胞提取物的 SMAD2/3 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 SMAD2/3 (D7G7) XP®。使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 对来自 HT1080 细胞（人）、C2C12 细胞（小鼠）和 B35（大鼠）细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在 SMAD4 的已知靶标基因 ID1 内的结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb（绿色）对血清饥饿（左图）或已经 hTGF-β3 #8425 处理（右图）的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb（绿色）对血清饥饿（左图）、经 hTGF-β3 #8425（100 ng/ml，30 分钟，中图）处理或经 hTGF-β3 和 SB43152（10 ug/mL，1 小时，右图）处理的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经人 TGF-β3 #3706（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞的交联染色质和 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human c-Myc intron 1 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520（上图）或总 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（下图），对经 TGF-β1、TGFR 抑制剂 SB-431542 或 BMP-2 处理的 HT1080 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在染色体 20（上图）内的结合，包括 SMAD4 的已知靶基因 ID1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb（实线）对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）比较，使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb（实线）对 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor®488Conjugate) #4412 用作二抗。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左图）或经 TGFβ 处理（右图）的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human JunB promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量使用与染色质输入总量（相当于1）相对应的信号表示。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    与非特异阴性对照抗体（红色）比较，使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（蓝色）对 HT-1080 细胞进行流式细胞分析。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 Human TGF-β 3 #8425 (7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质，在加入 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 ID1（SMAD2/3 的已知靶标基因）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及CDKN1A（ SMAD3 的已知靶标基因）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示结合作用遍及第 20号染色体（上图），包括ID1（SMAD2/3 的已知靶基因） （下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 6 号染色体（上图），包括 SMAD3 的已知靶标基因 CDKN1A（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    SMAD2/3 Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以来自经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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