Revision 1

#8348Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
MDA-5 (D74E4) Rabbit mAb 5321 20 µl 135 kDa Rabbit IgG
Rig-I (D14G6) Rabbit mAb 3743 20 µl 102 kDa Rabbit IgG
MAVS Antibody 3993 20 µl 75, 52 kDa Rabbit 
IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 11904 20 µl 50-55 kDa Rabbit IgG
TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb 3504 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb 5483 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRF-3 (Ser396) (4D4G) Rabbit mAb 4947 20 µl 45-55 kDa Rabbit IgG
Phospho-IKKε (Ser172) (D1B7) Rabbit mAb 8766 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
IKKε (D20G4) Rabbit mAb 2905 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation state and total protein levels of multiple members of the Rig-I pathway including Rig-I, MDA-5, MAVS, IRF-3, TBK1/NAK, and IKKε. The kit includes enough primary antibody to perform two western blot experiments per antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Antiviral innate immunity depends on the combination of parallel pathways triggered by virus detecting proteins in the Toll-like receptor (TLR) family and RNA helicases, such as Rig-I (retinoic acid-inducible gene I) and MDA-5 (melanoma differentiation-associated antigen 5), which promote the transcription of type I interferons (IFN) and antiviral enzymes (1-3). TLRs and helicase proteins contain sites that recognize the molecular patterns of different virus types, including DNA, single-stranded RNA (ssRNA), double-stranded RNA (dsRNA), and glycoproteins. These antiviral proteins are found in different cell compartments; TLRs (i.e. TLR3, TLR7, TLR8, and TLR9) are expressed on endosomal membranes and helicases are localized to the cytoplasm. Rig-I expression is induced by retinoic acid, LPS, IFN, and viral infection (4,5). Both Rig-I and MDA-5 share a DExD/H-box helicase domain that detects viral dsRNA and two amino-terminal caspase recruitment domains (CARD) that are required for triggering downstream signaling (4-7). Rig-I binds both dsRNA and viral ssRNA that contains a 5'-triphosphate end not seen in host RNA (8,9). Though structurally related, Rig-I and MDA-5 detect a distinct set of viruses (10,11). The CARD domain of the helicases, which is sufficient to generate signaling and IFN production, is recruited to the CARD domain of the MAVS/VISA/Cardif/IPS-1 mitochondrial protein, which triggers activation of NF-κB, TBK1/IKKε, and IRF-3/IRF-7 (12-15).

  1. Yoneyama, M. and Fujita, T. (2007) J Biol Chem 282, 15315-8.
  2. Meylan, E. and Tschopp, J. (2006) Mol Cell 22, 561-9.
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  15. Seth, R.B. et al. (2005) Cell 122, 669-82.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #8348

    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit

    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP ® Rabbit mAb #11904 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb, #11904（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb, #4970（下图）对对照型 HeLa 细胞（泳道 1） 或 IRF-3 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。IRF-3 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了该抗体对 IRF-3 的特异性。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 IKKε (D20G4) Rabbit mAb 对重组 GST-IKKε #7553 和 Ramos 细胞和 RL 细胞的裂解物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 TBK/NAK (D1B4) 兔单克隆抗体 #3504（上图）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对未经处理 (-) 的或 TBK1/NAK 敲除型 (+) HCT116 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Rig-I (D14G6) Rabbit mAb 对未经或已经 LPS（1 ug/ml，过夜）处理的分化 THP-1 和 RAW 264.7 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 MAVS Antibody 对 LNCaP 细胞系、MCF-7 细胞系和 HT29 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (4D4G) Rabbit mAb，对对照品经 plpC 转染 (1 小时) 的 HT29 和 THP1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 MDA-5 (D74E4) Rabbit mAb，对 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，而 293T 细胞经转染空载 (-) 或使用人类 MDA-5 (+) 进行转染。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS (1 μg/ml) 处理长达 24 小时的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-IKKε (Ser172) (D1B7) Rabbit mAb (上图) 或 IKKε (D20G4) Rabbit mAb #2905(下图)，对经 TPA #4174(80nM, 过夜) 分化之后以 LPS (1 μg/ml, 指定时间) 处理的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 MAVS Antibody 对转染空载或转染人MAVS 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 MDA-5 (D74E4) Rabbit mAb，对未处理或用脂多糖（1 μg/ml，按所示时间处理）处理的已分化 THP-1 细胞提取物，进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS（1 μg/ml，1 小时）处理、未经处理或已经磷酸酶处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（泳道 3），对 THP-1 细胞提取物的 IRF-3进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 作为二抗。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Rig-I (D14G6) Rabbit mAb 对 Raw264.7 和 CHO 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 MAVS Antibody（绿色）对 MCF-7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析，从而证实与 MitoTracker® Red CMXRos（红色）标记的线粒体存在共定位。蓝色伪彩 = DRAQ5™ （DNA 荧光染料）。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（绿色）对用 TPA #4174（80nM，过夜）（左图）处理后用 LPS（1μg/ml，1 小时）（中图）处理或用 LPS 和 λ 磷酸酶处理（右图）的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 Phalloidin（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经（左）或经 Poly (I:C)（2.5 μg/ml，6 小时；右）转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对用 TPA（80 nM，4 天）#9905 分化、未经处理（蓝色）或已经过 LPS（1 ug/ml，1 小时；绿色）#14011 处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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