Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P06400

Entrez-Gene Id:

5925

Product Information

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibodies detect endogenous levels of Rb only when phosphorylated at the target sites. The monoclonal Rb antibody does not recognize the Rb homologues p107 or p130, or other proteins.

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with synthetic peptides corresponding to residues surrounding Ser780, Ser795 or Ser807/811 of human Rb. Polyclonal antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography. Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a fusion protein (Rb-C Fusion Protein #6022) containing residues 701-928 of human Rb .

Product Description

The PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit provides reagents and protocols for the rapid analysis of Rb phosphorylation.

Background

The retinoblastoma tumor suppressor protein Rb regulates cell proliferation by controlling progression through the restriction point within the G1-phase of the cell cycle (1). Rb has three functionally distinct binding domains and interacts with critical regulatory proteins including the E2F family of transcription factors, c-Abl tyrosine kinase, and proteins with a conserved LXCXE motif (2-4). Cell cycle-dependent phosphorylation by a CDK inhibits Rb target binding and allows cell cycle progression (5). Rb inactivation and subsequent cell cycle progression likely requires an initial phosphorylation by cyclin D-CDK4/6 followed by cyclin E-CDK2 phosphorylation (6). Specificity of different CDK/cyclin complexes has been observed in vitro (6-8) and cyclin D1 is required for Ser780 phosphorylation in vivo (9).

  1. Sherr, C.J. (1996) Science 274, 1672-7.
  2. Nevins, J.R. (1992) Science 258, 424-9.
  3. Welch, P.J. and Wang, J.Y. (1993) Cell 75, 779-90.
  4. Hu, Q.J. et al. (1990) EMBO J 9, 1147-55.
  5. Knudsen, E.S. and Wang, J.Y. (1997) Mol Cell Biol 17, 5771-83.
  6. Lundberg, A.S. and Weinberg, R.A. (1998) Mol Cell Biol 18, 753-61.
  7. Connell-Crowley, L. et al. (1997) Mol Biol Cell 8, 287-301.
  8. Kitagawa, M. et al. (1996) EMBO J 15, 7060-9.
  9. Geng, Y. et al. (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98, 194-9.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#9300

PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit

PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 1 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 2 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 3 Expand Image
使用 Phospho-Rb (Ser795) Antibody 对经同步血清饥饿的人成纤维细胞提取物进行蛋白质印迹分析。细胞经同步处理 24 小时后,通过添加血清并在指定时间收取后释放。细胞周期进程通过周期素分析和 FACS 进行验证。(由 Dupont/Merck, Delaware 的 John Boylan 提供)。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 4 Expand Image
使用 Phospho-Rb (Ser795) Antibody #9301(左图)或对照抗体(右图),对经 cdc2/周期素 B 蛋白激酶 (New England Biolabs #P6020) 体外磷酸化之前 (-) 和之后 (+) 的 Rb-C Fusion Protein #6022(Rb 的氨基酸 701-928 融合到 MBP)进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 5 Expand Image
使用 Phospho-Rb (Ser780) Antibody 对经血清饥饿同步化处理的人成纤维细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞经同步处理 24 小时后,通过添加血清释放并在规定时间收获。细胞周期进程通过周期素分析和 FACS 进行验证。(由 Dupont/Merck, Delaware 的 John Boylan 提供)。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 6 Expand Image
使用 Phospho-Rb (Ser807/811) Antibody 对经血清饥饿同步处理的人成纤维细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。细胞经同步处理 24 小时后,通过添加血清释放并在规定时间收获。细胞周期进程通过周期素分析和 FACS 进行验证。(由 Dupont/Merck, Delaware 的 John Boylan 提供)。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 7 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb #9309(上图)和 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对 HeLa 细胞(泳道 1)或 Rb 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。Rb 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 Rb 的特异性。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 8 Expand Image
使用 Phospho-Rb (Ser795) Antibody(上)或 Rb (4H1) mAb #9309(下),对 Rb Control Protein #9303 进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 9 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb #9309 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 ,对转染 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-)、SignalSilence® Rb siRNA I #6451 (+) 或 SignalSilence® Rb siRNA II (+) 的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Rb (4H1) Mouse mAb 确认 Rb 表达沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用于对照上样量和 Rb siRNA 的特异性。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 10 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对未经或已经羟基脲处理 (G1/S) 的 COS-7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 11 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对石蜡包埋的且显示胞核定位的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 12 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 13 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人食道癌细胞进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 14 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人 T 细胞淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 15 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对石蜡包埋的人胃腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 16 Expand Image
使用 Rb (4H1) Mouse mAb(绿色)对 SH-SY5Y 细胞进行共聚焦免疫荧光图像分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 17 Expand Image
以碘化丙啶(DNA 含量)作为对照,使用 Rb (4H1) Mouse mAb 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。该盒表示 Rb 阳性细胞。
PhosphoPlus® Rb (Ser780, Ser795, Ser807/811) Antibody Kit: Image 18 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对 Raji 细胞中提取的交联染色质,在加入 Rb (4H1) Mouse mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human Timeless Intron 1 Primers #7001、人 DHFR 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集 DNA 进行量化。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。