Revision 1

#4889Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Skp1 Antibody 2156 20 µl 19 kDa Rabbit 
Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 2652 20 µl 48 kDa Rabbit IgG
ISG15 (22D2) Rabbit mAb 2758 20 µl 15 kDa Rabbit IgG
NEDD8 (19E3) Rabbit mAb 2754 20 µl 9 kDa Rabbit IgG
Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb 3936 20 µl Mouse IgG1
UBC3 Antibody 4997 20 µl 32 kDa Rabbit 
SUMO-1 Antibody 4930 20 µl Rabbit 
SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb 4971 20 µl Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

This sampler kit provides an economical means to investigate protein folding and stability. The kit contains primary and secondary antibodies to perform two Western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The small regulatory protein ubiquitin is often covalently linked to many cellular proteins, labeling these targeted proteins for proteasome-mediated degradation. Ubiquitin is first activated by forming a thiolester complex with the E1 activation component. Activated ubiquitin is subsequently transferred to the ubiquitin-carrier protein E2, and then to an E3 ubiquitin ligase for final delivery to the ε-NH2 of the target protein lysine residue (1). The ubiquitin-proteasome pathway has been implicated in a wide range of both normal biological processes and diseases (2,3).
The ubiquitin-like protein family contains three small ubiquitin-related modifier proteins (SUMO-1, -2 and -3), neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated protein 8 (NEDD8) and interferon-stimulated 15 kDa protein (ISG15) (4-6). Their covalent attachment to target proteins is a reversible, multi-step process that is analogous to protein ubiquitination. Mature molecules are linked to the activating enzyme E1, conjugated to E2 and ligated to the target proteins by E3 (7-10). Ubiquitin is the predominant regulator for the degradation of a wide range of target proteins (8) while SUMO, NEDD8 and ISG15 modify a limited set of substrates to regulate various other biological processes (4, 11-18).
During ubiquitination, the combinatorial interaction of different E2 and E3 proteins produces variable substrate specificity (4). UBC3 and UBC3B are E2 ubiquitin-carrier proteins (19, 20). The SCF (Skp1/CUL1/F-box) E3 ubiquitin ligase protein complex is composed of three protein components, including the S phase kinase associated protein 1 (Skp1), Cullin homolog 1 (CUL1) and the Skp2 F-box protein (21-23).

  1. Ciechanover, A. (1998) EMBO J. 17, 7151-7160.
  2. Bernardi, R. et al. (2000) Oncogene 19, 2447-2454.
  3. Jesenberger, V. and Jentsch, S. (2002) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3, 112-121.
  4. Schwartz, D.C. and Hochstrasser, M. (2003) Trends Biochem. Sci. 28, 321-328.
  5. Chiba, T. and Tanaka, K. (2004) Curr. Protein Pept. Sci. 5, 177-184.
  6. Ritchie, K.J. and Zhang, D.E. (2004) Semin. Cell Dev. Biol. 15, 237-246.
  7. Kim, K.I. et al. (2002) J. Cell Physiol. 191, 257-268.
  8. Osaka, F. et al. (1998) Genes Dev. 12, 2263-2268.
  9. Loeb, K.R. and Haas, A.L. (1992) J. Biol. Chem. 267, 7806-7813.
  10. Zhao, C. et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 10200-10205.
  11. Matunis, M.J. et al. (1996) J. Cell Biol. 135, 1457-1470.
  12. Duprez, E. et al. (1999) J. Cell Sci. 112 ( Pt 3), 381-393.
  13. Gostissa, M. et al. (1999) EMBO J. 18, 6462-6471.
  14. Rodriguez, M.S. et al. (1999) EMBO J. 18, 6455-6461.
  15. Desterro, J.M. et al. (1998) Mol. Cell 2, 233-239.
  16. Stickle, N.H. et al. (2004) Mol. Cell. Biol. 24, 3251-3261.
  17. Xirodimas, D.P. et al. (2004) Cell 118, 83-97.
  18. Hamerman, J.A. et al. (2002) J. Immunol. 168, 2415-2423.
  19. Semplici, F. et al. (2002) Oncogene 21, 3978-3987.
  20. Pagano, M. et al. (1995) Science 269, 682-685.
  21. Yu, Z.K. et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 11324-11329.
  22. Pagano, M. (2004) Mol. Cell 14, 414-416.
  23. Reed, S.I. (2003) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4, 855-864.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #4889

    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit

    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    对使用 SUMO-1 Antibody #4930（左图，红色）标记的固定冷冻的小鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。然后将游离的二抗结合位点用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 阻断，之后用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #88187（右图，绿色）、Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #31411（右图，伪彩灰色）和 DAPI #4083（右图，蓝色）进行共同标记。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody #4930（左图，红色）标记以及使用 Synaptophysin (7H12) Mouse mAb (IF Formulated) #9020（右图，绿色）和 DAPI #4083（右图，蓝色）共同标记的固定冷冻的小鼠海马 CA1 区进行共聚焦免疫荧光分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Skp1 Antibody 对 PC12 和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 NEDD8 (19E3) Rabbit mAb、Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb #3936、ISG15 Antibody #2743 和 SUMO-2/3 Antibody #4974，对泛素、NEDD8、ISG15 和 SUMO-2/3 重组蛋白（每个 5 ng）进行蛋白质印迹法分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 ISG15 (22D2) Rabbit mAb，对未处理 (-) 或使用 IFN-α (1000 U/mL) (+) 处理 24 小时的 HeLa 和 A549 细胞裂解物，进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb 对未经处理或已经 26S 蛋白酶体抑制蛋白 MG132（50 µM，90 分钟）处理的 293 和 Hela 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody 对重组 GST-SUMO-1 蛋白 (38 kDa) 及 CAD、HeLa 和 PC-12 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb（上图）和 SUMO-1 Antibody #4930（下图），对重组 GST-SUMO-1 蛋白 (38 kDa)、重组 SUMO-2、重组 SUMO-3 及 C6 和 PC12 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 UBC3 Antibody 对 Jurkat、CAD 和 C6 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    与同型对照（右图）相比较，对使用 Skp1 Antibody（绿色，左图）标记的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光图像分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb， 对转染空载 (-) 或转染能编码全长人 Skp2 的带有 Myc/DDK 标签的 cDNA 表达载体 (hSkp2-Myc/DDK, +) 的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 NEDD8 (19E3) Rabbit mAb，对 HeLa、RAW、C6 和 COS 细胞的裂解物进行蛋白质印迹法分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb 对石蜡包埋的且显示细胞核和细胞浆泛素定位的乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb（绿色）对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight® 554 Phalloidin #13054（红色）标记。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    以非特异性阴性对照抗体（红色）作为对照，使用 Skp1 Antibody（蓝色）对 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对表达非靶向 shRNA (shNT) 或 shSkp2 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 NEDD8 (19E3) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 NEDD8 (19E3) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人体卵巢癌进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SUMO-1 Antibody（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555（红色）标记。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用经过对照肽（左）或 Nedd8 Blocking Peptide #1048（右）预培育的 NEDD8 (19E3) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Protein Folding and Stability Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Skp2 (D3G5) XP® Rabbit mAb（绿色），对表达非靶向 shRNA（shNT；左图）或 Skp2（右图）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 phalloidin（红色）标记（细胞系由哈佛大学医学院的 Wenyi Wei 博士惠赠）。
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