Revision 1

#33738Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb 17700 20 µl 14 kDa Rabbit IgG
Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb 28070 20 µl 14-16 kDa Rabbit IgG
Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb 13414 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
SNAP25 (D7B4) Rabbit mAb 5308 20 µl 25 kDa Rabbit IgG
Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 36406 20 µl 38 kDa Rabbit IgG
Synaptotagmin-1 (D33B7) Rabbit mAb 14558 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb 5297 20 µl 77 kDa Rabbit IgG
Syntaxin 1A (D4E2W) Rabbit mAb 18572 20 µl 33 kDa Rabbit IgG
VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 13508 20 µl 13 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting expression of key synaptic vesicle proteins. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

The synapse is the unit of information transfer in the brain between neurons (1). Synaptic transfer is initiated by action potential-initiated synaptic vesicles fusion at the presynaptic terminal to release neurotransmitters. The basic molecular machinery that drives all membrane fusion events in all cells include N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor (SNARE) proteins that form a trans-ternary complex between to-be-fused membranes. The zippering up of SNARE proteins provides the energy required for membrane fusion. At the synapse, the SNARE proteins include 25 kDa synaptosome-associated protein (SNAP25), syntaxin 1A (STX1A), and vesicle-associated membrane protein 2 (VAMP2, also called synaptobrevin). Neurotransmitter release, however, is a highly regulated process that occurs in response to action potential-initiated Ca2+-influx. Regulation of synaptic vesicle fusion is mediated by SNARE-binding proteins like complexin and the Ca2+-associated vesicle protein, synaptotagmin-1, that cooperatively function to initiate Ca2+-induced synaptic vesicle fusion. The synaptic vesicle cycle represents a cycle of events that prime the synaptic vesicle before fusion and retrieve fused membrane after full fusion. Synaptic vesicle-associated proteins like synaptophysin and synapsin-1, as well as target membrane proteins like Munc18-1, play a complex role in priming synaptic vesicles to be fusion competent.   

  1. Südhof, T.C. and Rothman, J.E. (2009) Science 323, 474-7.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    Revision 1
    #33738

    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit

    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from rat brain using Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb #13414. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from mouse brain using Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb #36406. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from CAD cells using Synapsin-1 (D12G5) XP Rabbit mAb #5297. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb 对小鼠脑、大鼠脑和人类脑皮质的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 对不同细胞系和组织的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Synaptotagmin-1 (D33B7) Rabbit mAb 对小鼠和大鼠脑细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Syntaxin 1A (D4E2W) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对小鼠脑、小鼠肺和大鼠脑细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对 Neuro-2a、NIH/3T3 和小鼠脑的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb(上图)和 B-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对小鼠和大鼠组织的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb 对 CAD 细胞和新生小鼠脑组织提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 SNAP25 (D7B4) Rabbit mAb 对小鼠和大鼠脑提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb(上图)和 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带有 Myc 标签的全长人 VAMP1 (hVAMP1-Myc; +) 或 VAMP2 (hVAMP2-Myc; +) 的表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Synaptotagmin-1 (D33B7) Rabbit mAb(绿色)对小鼠视网膜组织进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb(上图)和 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下图)对转染空载 (-) 或经构建表达和 Myc 标记的全长人 complexin-1 (hCPLX-1-Myc; +) 或 complexin-2 (hCPLX-2-Myc; +) 转染 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb(上图)和 Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(下图)对转染空载 (-) 或经构建表达和 Myc 标记的全长人 complexin-1 (hCPLX-1-Myc; +) 或 complexin-2 (hCPLX-2-Myc; +) 转染 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Neuro-2a 细胞沉淀物(左图,阳性)或 C2C12 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人小脑组织进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb(泳道 3)对 Neuro-2a 细胞提取物 VAMP2 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.5 mg/mL) from IMR-32 cells using Synaptotagmin-1 (D33B7) Rabbit mAb #14558. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    对 Neuro-2a 细胞提取物中的 complexin-1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb。使用 Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    对 Neuro-2A 细胞提取物中的 complexin-1/2 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb。使用 Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠小脑细胞进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑皮质进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb(绿色)对 Neuro-2a(阳性,左图)和 NIH/3T3(阴性,右图)进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色,上图)对肌动蛋白纤丝进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb(绿色)对 Neuro-2a(左图)和 NIH/3T3(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠细胞进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的大鼠视网膜进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 对石蜡包埋的大鼠肾进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非小细胞肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb(绿色)和 β3-Tubulin (TU-20) Mouse mAb #4466(红色),对小鼠脑进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胰腺进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人子宫内膜腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb(绿色)和 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #3656(红色)对正常大鼠视网膜细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胰腺细胞进行免疫组织化学分析。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 VAMP2 (D6O1A) Rabbit mAb(绿色)对 PC-12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb(绿色)、Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb #2835(黄色)和 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb #4777(红色)对小鼠视网膜进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
    Presynaptic Vesicle Cycle Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb(绿色)、Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb #2835(黄色)和 Lamin A/C (4C11) Mouse #4777(红色)对小鼠脑进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。