Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 94205 100 µl H M R 90 Rabbit IgG
Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb 4322 100 µl H M 90 Rabbit IgG

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Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Stat5 is activated in response to a wide variety of ligands, including IL-2, GM-CSF, growth hormone, and prolactin. Phosphorylation at Tyr694 is obligatory for Stat5 activation (1,2). This phosphorylation is mediated by Src upon erythropoietin stimulation (3). Stat5 is constitutively active in some leukemic cell types (4). Phosphorylated Stat5 is found in some endothelial cells treated with IL-3, which suggests its involvement in angiogenesis and cell motility (5). Stat5a and Stat5b are independently regulated and activated in various cell types. For instance, interferon treatment predominantly activates Stat5a in U-937 cells and Stat5b in HeLa cells (6).

  1. Gouilleux, F. et al. (1994) EMBO J 13, 4361-9.
  2. Wakao, H. et al. (1994) EMBO J 13, 2182-91.
  3. Okutani, Y. et al. (2001) Oncogene 20, 6643-50.
  4. Demoulin, J.B. et al. (1999) J Biol Chem 274, 25855-61.
  5. Dentelli, P. et al. (1999) J Immunol 163, 2151-9.
  6. Meinke, A. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 6937-44.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #8215

    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb #4322 对经过 hIL-2（10 ng/mL，O/N）处理的血清饥饿 NK-92 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb #94205 对 HDLM-2 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb #94205 对 HDLM-2 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb，对未经处理或经红细胞生成素处理（EPO；3 单位/ml，5 分钟）的 UT-7 细胞、未经处理或经 Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor #8922 处理（hGM-CSF；100 ng/ml，10 分钟）的 TF-1 细胞、未经处理或经 Human Interleukin-2 #8907 处理（hIL-2；100 ng/ml，10 分钟）的 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb (上图) 与 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图)，对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) XP® (D47E7) Rabbit mAb （绿色）和 Pan-Keratin (C11) Mouse mAb #4545（红色），对经 EGF 处理（左）或未经处理（右）的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染人全长 Stat5a (+) 或 Stat5b (+) 表达载体的 PC-3 细胞进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色，低）或已经过 hGM-CSF #8922（50ng/ml，15 分钟；绿色）处理的 TF-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    对 K-562 细胞提取物Stat5 进行免疫沉淀。泳道 1 为10% input，泳道 2 经 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb。使用 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。
    PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 IL-3 饥饿处理 6 小时后以 IL-3 诱导 45 分钟的 BaF3 细胞的交联染色质和 Stat5 (D2O6Y) Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Mouse CIS Intron 1 Primers #5131、mouse SOCS-3 promoter primers 和 SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers #7015，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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