Revision 1

#9925Store at -20C

1 个试剂盒

(4 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-Syk (Tyr323) Antibody 2715 20 µl 72 kDa Rabbit 
Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb 2710 20 µl 72 kDa Rabbit IgG
Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody 2701 20 µl 70 Zap-70, 72 Syk kDa Rabbit 
Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 13198 20 µl 72 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

Phospho-Syk Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation status of Syk, including the phosphorylation of Tyr323, Tyr352 and Tyr525/526. The control Syk Antibody is also included. The kit contains enough primary and secondary antibodies for two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Syk is a protein tyrosine kinase that plays an important role in intracellular signal transduction in hematopoietic cells (1-3). Syk interacts with immunoreceptor tyrosine-based activation motifs (ITAMs) located in the cytoplasmic domains of immune receptors (4). It couples the activated immunoreceptors to downstream signaling events that mediate diverse cellular responses, including proliferation, differentiation, and phagocytosis (4). There is also evidence of a role for Syk in nonimmune cells and investigators have indicated that Syk is a potential tumor suppressor in human breast carcinomas (5). Tyr323 is a negative regulatory phosphorylation site within the SH2-kinase linker region in Syk. Phosphorylation at Tyr323 provides a direct binding site for the TKB domain of Cbl (6,7). Tyr352 of Syk is involved in the association of PLCγ1 (8). Tyr525 and Tyr526 are located in the activation loop of the Syk kinase domain; phosphorylation at Tyr525/526 of human Syk (equivalent to Tyr519/520 of mouse Syk) is essential for Syk function (9).

  1. Cheng, A.M. and Chan, A.C. (1997) Curr Opin Immunol 9, 528-33.
  2. Kurosaki, T. (1997) Curr Opin Immunol 9, 309-18.
  3. Chu, D.H. et al. (1998) Immunol Rev 165, 167-80.
  4. Turner, M. et al. (2000) Immunol Today 21, 148-54.
  5. Coopman, P.J. et al. (2000) Nature 406, 742-7.
  6. Deckert, M. et al. (1998) J Biol Chem 273, 8867-74.
  7. Rao, N. et al. (2001) EMBO J 20, 7085-95.
  8. Law, C.L. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 1305-15.
  9. Zhang, J. et al. (2000) J Biol Chem 275, 35442-7.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #9925

    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit

    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb（绿色）、DyLight™ 650 Phalloidin #12956（红色）和 DAPI #4083（蓝色），对 SW620 细胞（左图，阳性）和 ACHN 细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb #13198 对 Raji 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (1.0 mg/mL) from Jurkat cells using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody #2701. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 66-440 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from Ramos cells treated with Anti-Human IgM (12 ug/mL, 10”) using Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb #2710. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody（上图）或对照品 Zap-70 Antibody #2702（下图）对饥饿 16 小时且经 2 mM H2O2 或牛小肠碱性磷酸酶 (CIP) 处理的 Jurkat 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb（上）或 Syk Antibody #2712（下），对未经处理或经抗 IgM 处理的 Ramos 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Syk (Tyr323) Antibody（上图）或 Syk Antibody #2712（下图）对表达重组野生型或突变 Syk 蛋白的且共转染 CD8 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。（由马萨诸塞州哈佛大学 Hamid Band 博士实验室的 Alagarsamy L. Reddi 博士惠赠）。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Syk(D3Z1E) XP® Rabbit mAb（泳道 3）对 SR 细胞提取物 Syk 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb（上图）对 THP-1 WT（左图）或 SYK KO（右图）细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。用 Ponceau S 染色的膜进行总蛋白标准化（下图）。这些数据由 YCharOS Inc. 提供，该公司是一家开放科学公司，作为 CST 科学家生成的验证数据的合作伙伴，其使命是表征市售抗体。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody 对未经处理或已经抗 IgM（12 µg/ ml，2 分钟）、过氧化氢（10 mM，2 分钟）或 λ 磷酸酶处理的 Ramos 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb（绿色），对血清饥饿（过夜；左）或经 IgM 处理（12 ug/ml，2 分钟；右）的 Ramos 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-Syk (Tyr323) Antibody #2715（上图）或 Syk Antibody #2712（下图）对未经处理或已经抗人 IgM (10 µg/ml) 处理的 Ramos 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody（红色）对未经处理（右图）或已经 CD3（左图）处理的 Jurkat 细胞进行免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5™ （DNA 荧光染料）。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb 或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（蓝色）或已经抗 IgM（绿色）处理的 Ramos 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (PE Conjugate) #8885 用作二抗。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴结细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody 和 Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) (E10) mAb #9106 对未经处理（左图）或已经抗 CD3（右图）激活的 Jurkat 细胞进行双色流式细胞分析。抗 CD3 激活会加强用两种抗体标记的强度。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    在有对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）的情况下，使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脾脏细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    以非特异性阴性对照抗体（红色）作为对照，使用 Phospho-Zap70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody 对未经处理（蓝色）或已经 CD3（绿色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    Phospho-Syk Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    以 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（红色）作为对照，使用 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb（蓝色）对 RL 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。
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