Revision 1

#9914Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 7649 20 µl 84, 91 kDa Rabbit IgG
Phospho-Stat2 (Tyr690) Antibody 4441 20 µl 113 kDa Rabbit 
Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 9145 20 µl 79, 86 kDa Rabbit IgG
Phospho-Stat3 (Ser727) Antibody 9134 20 µl 86 kDa Rabbit 
Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb 4322 20 µl 90 kDa Rabbit IgG
Phospho-Stat6 (Tyr641) Antibody 9361 20 µl 110 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Phospho-Stat Pathway Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation status of Stat molecules, including the phosphorylation of Stat1 at Tyr701, Stat2 at Tyr690, Stat3 at Tyr705/Ser727, Stat5 at Tyr694 and Stat6 at Tyr641. The kit includes enough primary and secondary antibody to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Jaks (Janus Kinases) and Stats (Signal Transducers and Activators of Transcription) are utilized by receptors for a wide variety of ligands including cytokines, hormones, growth factors and neurotransmitters. Jaks, activated via autophosphorylation following ligand-induced receptor aggregation, phosphorylate tyrosine residues on associated receptors, Stat molecules and other downstream signaling proteins (1,2). The phosphorylation of Stat proteins at conserved tyrosine residues activates SH2-mediated dimerization followed rapidly by nuclear translocation. Stat dimers bind to IRE (interferon response element) and GAS (gamma interferon-activated sequence) DNA elements, resulting in the transcriptional regulation of downstream genes (1,2). The remarkable range and specificity of responses regulated by the Stats is determined in part by the tissue-specific expression of different cytokine receptors, Jaks and Stats (2,3), and by the combinatorial coupling of various Stat members to different receptors. Serine phosphorylation in the carboxy-terminal transcriptional activation domain has been shown to regulate the function of Stat1, -2, -3, -4 and -5 (1). Phosphorylation of Stat3 at Ser727 via MAPK or mTOR pathways is required for optimal transcriptional activation in response to growth factors and cytokines including IFN-gamma and CNTF (4,5). Jak/Stat pathways also play important roles in oncogenesis, tumor progression, angiogenesis, cell motility, immune responses and stem cell differentiation (6-11).

  1. Darnell Jr., J. et al. (1994) Science 264, 1415-1421.
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Background References

    Trademarks and Patents

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    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #9914

    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit

    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb #4322 对经过 hIL-2（10 ng/mL，O/N）处理的血清饥饿 NK-92 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145（上图）、Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb #12640（中图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理或已经过 IFNa（#36000，100 ng/mL，5 分钟）或 IFNg（#80385，100 ng/mL，30 分钟）处理的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145 对经过 IFN-α（100 ng/mL，5 分钟）处理的血清饥饿 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb，对未经处理或经红细胞生成素处理（EPO；3 单位/ml，5 分钟）的 UT-7 细胞、未经处理或经 Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor #8922 处理（hGM-CSF；100 ng/ml，10 分钟）的 TF-1 细胞、未经处理或经 Human Interleukin-2 #8907 处理（hIL-2；100 ng/ml，10 分钟）的 NK-92 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Stat2 Antibody（上图）或 Phospho-Stat2 (Tyr690) Antibody（下图），对未经处理或已经 IFN-α（100 ng/ml，15 分钟）处理的 Hela 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb（上图）或 Stat1 Antibody #9172（下图），对未经处理或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927（10 ng/ml，30 分钟）处理的 HeLa、A20 和 PC-12 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Ser727) Antibody（上图）和 Stat3 (79D7) Rabbit mAb #4904（下图），对未经处理或已经紫外线（100 mJ，30 分钟；+）处理、未经处理或已经 λ 磷酸酶 (+) 处理的 A172 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb，对 IFN-α 处理的 Jurkat 细胞、Hela 细胞（左）、经 EGF 处理的 A431 细胞（右）提取物进行蛋白质印迹分析。注意，抗体可检测 A431 的基础磷酸化 Stat3。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Stat6 (Tyr641) Antibody（上图）或 Stat6 antibody（下图），对已经 IL-4 (100 ng/ml) 处理规定时间的 Daudi 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) XP® (D47E7) Rabbit mAb （绿色）和 Pan-Keratin (C11) Mouse mAb #4545（红色），对经 EGF 处理（左）或未经处理（右）的 A-431 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb（绿色）和 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116（红色），对未经处理（左图）或已经 hIFN-α1 #8927（100 ng/mL，30 分钟；右图）处理的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    对经人 IFN-α（50 ng/ml，15 分钟）处理的 U266 提取物中的磷酸化 Stat3 (Tyr705) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb。使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (3E2) Mouse mAb #9138 进行蛋白质印迹法分析。Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 用作二抗。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-Stat6 (Tyr641) Antibody（绿色）对血清饥饿（左图）或已经 IL-4 处理（右图）的 ACHN 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色，低）或已经过 hGM-CSF #8922（50ng/ml，15 分钟；绿色）处理的 TF-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 对未经处理（蓝色）或已经 hIFN-α1 #8927（绿色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 IRF-1 内结合，IRF-1 是磷酸 Stat1 的一种已知靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对饥饿过夜且已经 IL-6（100 ng/ml，30 分钟）处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Ser727) Antibody 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 ，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 4 x 106 个 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 5 μl Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 5（上图）内的结合，包括 Phospho-Stat1 的已知靶标基因 IRF1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phosho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Apc (min/+) 小鼠肠道进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析，显示出胞核定位。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb，对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的人乳腺癌（尤其是内皮细胞）进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 在 SignalSlide® HeLa -/+ IFNa IHC Controls #55861 上（对未经处理（左图）或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 处理（右图）的石蜡包埋的 Hela 细胞沉淀物）进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    对 IFN-α 处理（左）或未经处理（右）Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析，用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb（绿色）标记。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色）或已经过 IFNα（50 ng/ml，15 分钟；绿色）处理的 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml；30 分钟）处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 IRF1 内结合，IRF1 是 Phospho-Sata3 的一种已知靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit #56383，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml）处理30 分钟）的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663、human IRF1 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行量化。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Phospho-Stat Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml；30 分钟）处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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