Revision 1

#9912Store at -20C

1 个试剂盒

(4 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 4668 20 µl 46, 54 kDa Rabbit IgG
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb 4514 20 µl 44 kDa Rabbit 
Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 2361 20 µl 48 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Phospho-ATF-2 (Thr71)/ATF-7 (Thr53) (A8J7P) Rabbit mAb 15411 20 µl 65,75 kDa Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit provides a fast and economical means of evaluating multiple members of the SAPK/JNK pathway as well as their activation state. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The stress-activated protein kinase/Jun-amino-terminal kinase SAPK/JNK is potently and preferentially activated by a variety of environmental stresses, including UV and gamma radiation, ceramides, inflammatory cytokines, and in some instances, growth factors and GPCR agonists (1-6). As with the other MAPKs, the core signaling unit is composed of a MAPKKK, typically MEKK1-MEKK4, or by one of the mixed lineage kinases (MLKs), which phosphorylate and activate MKK4/7. Upon activation, MKKs phosphorylate and activate the SAPK/JNK kinase (2). Stress signals are delivered to this cascade by small GTPases of the Rho family (Rac, Rho, cdc42) (3). Both Rac1 and cdc42 mediate the stimulation of MEKKs and MLKs (3). Alternatively, MKK4/7 can be activated in a GTPase-independent mechanism via stimulation of a germinal center kinase (GCK) family member (4). There are three SAPK/JNK genes each of which undergoes alternative splicing, resulting in numerous isoforms (3). SAPK/JNK, when active as a dimer, can translocate to the nucleus and regulate transcription through its effects on c-Jun, ATF-2, and other transcription factors (3,5).

  1. Davis, R.J. (1999) Biochem Soc Symp 64, 1-12.
  2. Ichijo, H. (1999) Oncogene 18, 6087-93.
  3. Kyriakis, J.M. and Avruch, J. (2001) Physiol Rev 81, 807-69.
  4. Kyriakis, J.M. (1999) J Biol Chem 274, 5259-62.
  5. Leppä, S. and Bohmann, D. (1999) Oncogene 18, 6158-62.
  6. Whitmarsh, A.J. and Davis, R.J. (1998) Trends Biochem Sci 23, 481-5.

Background References

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    Revision 1
    #9912

    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit

    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb #4668 对经过紫外线(50 mJ,恢复 30 分钟)处理的 HEK293 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道视图(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的两个靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-ATF-2 (Thr71)/ATF-7 (Thr53) (A8J7P) 兔单克隆抗体(上图)、ATF-2/ATF-7 (A9G1M) 兔单克隆抗体 #82870(中间)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457 (下图),对未经处理 (-) 或Anisomycin(25 μg/ml, 30分钟;+)处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb(上)或 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165(下),对未经或经茴香霉素处理的 C6 细胞提取物;或者,对未经或经紫外线处理的 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb 对未经处理或已经山梨醇或紫外线按规定处理的不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对未经处理的或经紫外线处理的 293 细胞、未经处理或经紫外线处理的 NIH/3T3 细胞、或未经处理或经 anisomycin 处理的 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-ATF-2 (Thr71)/ATF-7 (Thr53) (A8J7P) 兔单克隆抗体(上图)、Myc-Tag (71D10) 兔单克隆抗体 #8457(中图)和 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #2278(下图),对转染空载 (-) 或转染带有 Myc 标签的全长人 ATF-2 蛋白 (hATF-2-Myc; +) 或 Myc 标签的全长人 ATF-7 蛋白 (hATF-7-Myc; +) 表达载体的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    在对照肽(左)或 Phospho-c-Jun (Ser63) II Blocking Peptide (#1020)(右)存在的情况下,使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    以非特异性阴性对照抗体(红色)作为对照,使用 Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb 对未经处理(蓝色)或已经紫外线(绿色)处理的 HT-29 细胞进行流式细胞分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    在对照肽(左)或 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) Blocking Peptide #1215(右)存在的情况下,使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对未经(左)或经(右)lambda 磷酸酶处理的石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对未经处理的(左)或经紫外线处理(右)的石蜡包埋 293T 细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用与非特异性阴性对照抗体(红色)作对比的 Phospho-ATF-2 (Thr71)/ATF-7 (Thr53) (A8J7P) 兔单克隆抗体 ,对未经处理(蓝色)或经 Anisomycin 处理(绿色)的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌(显示胞核定位)进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞聚合体(对照[左]或经茴香霉素处理过[右])进行免疫组织化学分析。
    Phospho-SAPK/JNK Pathway Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类皮肤(通常紧邻血管瘤)进行免疫组织化学分析。