Revision 1

#9910Store at -20C

1 个试剂盒

(3 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb 4511 20 µl 43 kDa Rabbit IgG
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 4370 20 µl 44, 42 kDa Rabbit IgG
Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 4668 20 µl 46, 54 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

The Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit provides an economical means of evaluating the phosphorylation state of p38, p44/42, and SAPK/JNK mitogen-activated protein kinases. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

p44/42 MAPK (Erk1/2), SAPK/JNK, and p38 MAPK function in protein kinase cascades that play a critical role in the regulation of cell growth, differentiation, and control of cellular responses to cytokines and stress. p44/42 MAPK is activated by growth and neurotrophic factors. Activation occurs through phosphorylation of threonine and tyrosine residues (Thr202 and Tyr204 in human Erk1) at the sequence T*EY* by a single upstream MAP kinase kinase (MEK). SAPK/JNK and p38 MAPK are activated by inflammatory cytokines and by a wide variety of cellular stresses. Activation of SAPK/JNK occurs via phosphorylation at Thr183 and Tyr185 by the dual specificity enzyme SEK/MKK4. Both MKK3 and SEK phosphorylate p38 MAPK on tyrosine and threonine at the sequence T*GY* to activate p38 MAP kinase (1-5).

  1. Lewis, T. S. et al. (1998) Adv. Cancer Res. 74, 49-139.
  2. Garrington, T.P. and Johnson, G.L. (1999) Curr. Opin. Cell. Biol. 11, 211-218.
  3. Schaeffer, H.J. and Weber, M.J. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 2435-2444.
  4. Whitmarsh, A.J. and Davis, R.J. (1998) Trends Biochem. Sci. 23, 481-485.
  5. Cobb, M.H. (1999) Prog. Biophys. Mol. Biol. 71, 479-500.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9910

    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit

    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from serum-starved HeLa cells treated with TPA (400 nM, 4 hours) using Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb #4668 对经过紫外线(50 mJ,恢复 30 分钟)处理的 HEK293 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道视图(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的两个靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) (3A7) Mouse mAb #9107,对未经处理或经 U0126 #9903(10 µM,1 小时)或 TPA #4174(200 nM,10 分钟)处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb(上)或 p38 MAPK Antibody # 9212(下),对未经处理或经紫外线处理的 COS 和 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对未经处理的或经紫外线处理的 293 细胞、未经处理或经紫外线处理的 NIH/3T3 细胞、或未经处理或经 anisomycin 处理的 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb(上)或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695(下),对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174 处理(如图)的 293 NIH/3T3 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    在对照肽(左)或 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) Blocking Peptide #1215(右)存在的情况下,使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb 对未经处理的(左)或经紫外线处理(右)的石蜡包埋 293T 细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb,对未经处理(左)或经紫外线处理(右)的石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls #8103( 经过 U0126 #9903(左图)或 TPA #4174(右图)处理的石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞)进行免疫组织化学分析。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317(红色),对未经处理(上)或经 λ 磷酸酶处理(下)的果蝇卵泡进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb(绿色),对未经处理(左)或经 anisomycin 处理(右)的 COS 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370(绿色)和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700(红色),对饥饿过夜,然后用 U0126 #9903(10 uM,2 小时;左)或 PDBu (Phorbol 12,13-Dibutyrate) #12808(100 nM,15 分钟;右)处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线),对未经处理(蓝色)或经 Anisomycin(25 µM,30 分钟;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对经 U0126(10 µM,2 小时;绿色)处理或经 TPA #4174 (200 nM,30 分钟;蓝色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Phospho-MAPK Family Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) 对 3T3 细胞提取物进行免疫沉淀分析。细胞用 TPA(200 nM,15 分钟)处理。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb。使用 Phosphop44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb #45262 作为二抗。