Revision 1

#9105Store at -20C

1 个试剂盒

(4 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb 5284 20 µl 23 kDa Rabbit IgG
Phospho-Bad (Ser136) (D25H8) Rabbit mAb 4366 20 µl 23 kDa Rabbit IgG
Phospho-Bad (Ser155) Antibody 9297 20 µl 23 kDa Rabbit 
Bad (D24A9) Rabbit mAb 9239 20 µl 23 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Phospho-Bad Antibody Sampler Kit provides an economical means to investigate the role of Bad protein in apoptosis. The kit contains primary and secondary antibodies to perform two Western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Bad is a proapoptotic member of the Bcl-2 family that promotes cell death by displacing Bax from binding to Bcl-2 and Bcl-xL (1,2). Survival factors, such as IL-3, inhibit the apoptotic activity of Bad by activating intracellular signaling pathways that result in the phosphorylation of Bad at Ser112 and Ser136 (2). Phosphorylation at these sites promotes binding of Bad to 14-3-3 proteins to prevent an association between Bad with Bcl-2 and Bcl-xL (2). Akt phosphorylates Bad at Ser136 to promote cell survival (3,4). Bad is phosphorylated at Ser112 both in vivo and in vitro by p90RSK (5,6) and mitochondria-anchored PKA (7). Phosphorylation at Ser155 in the BH3 domain by PKA plays a critical role in blocking the dimerization of Bad and Bcl-xL (8-10).

  1. Yang, E. et al. (1995) Cell 80, 285-291.
  2. Zha, J. et al. (1996) Cell 87, 619-628.
  3. Datta, S.R. et al. (1997) Cell 91, 231-241.
  4. Peso, L. et al. (1997) Science 278, 687-689.
  5. Bonni, A. et al. (1999) Science 286, 1358-1362.
  6. Tan, Y. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274, 34859-34867.
  7. Harada, H. et al. (1999) Mol. Cell 3, 413-422.
  8. Tan, Y. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275, 25865-25869.
  9. Lizcano, J. et al. (2000) Biochem. J. 349, 547-557.
  10. Datta, S. et al. (2000) Mol. Cell 6, 41-51.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Revision 1
    #9105

    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit

    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb #5284 对经过 TPA(200 nM,20 分钟)处理的血清饥饿 COS 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Bad (D24A9) Rabbit mAb #9239 对 OVCAR8 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser136) (D25H8) Rabbit mAb (上图) 或 Bad (D24A9) Rabbit mAb #9239 (下图),对未经处理或经人表皮生长因子#8916 (100 ng/ml,30分钟) 处理的 ACHN 细胞提取物,以及对未经处理或经胰岛素(100nM,30分钟) 处理 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb(上)或 Bad Antibody #9292(下),对未处理或经 TPA 处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Bad (D24A9) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser155) Antibody (上图) 或 Bad Antibody #9292(下图),对经过野生型 Bad、Bad (S112A/S136A) 和 Bad (S155A) 转染并经过 forskolin (30µM) 处理的293细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser136) (D25H8) Rabbit mAb (上图) 或 Bad (D24A9) Rabbit mAb #9239 (下图),对使用或不使用小牛肠激酶 (CIP) 及 λ 磷酸酶的情况下经人表皮生长因子#8916(100 ng/ml,30分钟) 处理的 COS-7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser 112) (40A9) Rabbit mAb,对未处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser136) (D25H8) Rabbit mAb,对含有 Bad Control Proteins #9293同时由非磷酸化和磷酸化 Bad 肽所组成的裂解物进行蛋白质印迹分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb,对未处理(左)或经 TPA 处理(右)且显示诱导胞质染色的石蜡包埋的 COS 细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用经对照肽(左)或 Phospho-Bad (Ser 112) Blocking Peptide (IHC Specific) #1026(右)预孵育的 Phospho-Bad (Ser 112) (40A9) Rabbit Monoclonal Antibody,对石蜡包埋的人前列腺癌进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb,对石蜡包埋的非霍奇金淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Phospho-Bad Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb,对未处理(蓝色)或经 TPA/Calyculin A 处理(绿色)的 COS 细胞进行流式细胞分析。