Revision 1

#78779Store at -20C

1 个试剂盒

(5 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 49360 20 µl 220 kDa Rabbit IgG
BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb 15125 20 µl 85 kDa Rabbit IgG
PBRM1/BAF180 (E9X2Z) Rabbit mAb 89123 20 µl 205 kDa Rabbit IgG
ARID2 (D8D8U) Rabbit mAb 82342 20 µl 220 kDa Rabbit IgG
SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 11956 20 µl 155 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The PBAF Complex Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting members of the PBAF chromatin remodeling complex. ARID2, BRD7, and PBRM1/BAF180 are unique members of the PBAF complex, while Brg1 and SMARCC1/BAF155 are shared with BAF and non-canonical BAF complexes. The kit includes enough antibody to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

ATP-dependent chromatin remodeling complexes play an essential role in the regulation of various nuclear processes, such as gene expression, DNA replication, and repair (1,2). The SWI/SNF chromatin remodeling complex consists of more than 10 subunits with a single molecule of the ATPase catalytic subunit BRM or BRG1, but not both. The activities of these two subunits drive the disruption of histone-DNA contacts that lead to changes in accessibility of crucial regulatory elements within chromatin (2-5). The BRM/BRG1 containing SWI/SNF complexes are recruited to target promoters by transcription factors, such as nuclear receptors, p53, RB, and BRCA1 to regulate gene activation, cell growth, the cell cycle, and differentiation processes (1,6-9).

PBRM1/BAF180, ARID2, and BRD7 are unique members of the SWI/SNF complex PBAF, which binds to kinetochores in mitotic chromatin (10,11). PBAF is involved in nuclear receptor-mediated transcription and retinoic acid driven gene activation (12,13). PBRM1/BAF180 has been shown to be a potent tumor suppressor, as it is the second-most mutated gene in renal carcinomas (14). ARID2 is the targeting subunit of the PBAF complex and critical for complex stability (15). Bromodomain-containing BRD7 interacts with acetylated histones to regulate gene transcription (16,17). SMARCC1/BAF155 is a core subunit of all BAF complexes including PBAF, and is necessary for efficient nucleosome remodeling by BRG1 in vitro (18).

  1. Ho, L. and Crabtree, G.R. (2010) Nature 463, 474-84.
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  18. Phelan, M.L. et al. (1999) Mol Cell 3, 247-53.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    SimpleChIP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #78779

    PBAF Complex Antibody Sampler Kit

    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    CUT&Tag was performed with NCCIT cells and SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb, using CUT&Tag Assay Kit #77552. DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. The figure shows binding across SOX2.
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina®(ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在 TNN 基因内结合。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 ARID2 (D8D8U) Rabbit mAb（上图）和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 PBRM1/BAF180 (E9X2Z) Rabbit mAb（上图）或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。正如预期的一样，HCC1143 细胞的 PBRM1/BAF180 表达呈阴性。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb （泳道 3），对 HeLa 细胞提取物 SMARCC1/BAF155 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    CUT&Tag was performed with NCCIT cells and SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb, using CUT&Tag Assay Kit #77552. DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. The figures show binding across chromosome 3 (upper), including SOX2 gene (lower).
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb（上）或 BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAb（下）对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在染色体 1（上图）内的结合，包括 TNN 基因（下图）。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对 Jurkat 细胞提取物 ARID2 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 ARID2 (D8D8U) Rabbit mAb。使用 ARID2 (D8D8U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对 Jurkat 细胞提取物的 PBRM1/BAF180 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 PBRM1/BAF180 (E9X2Z) Rabbit mAb。使用 PBRM1/BAF180 (E9X2Z) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在无酚红的培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 4 天，然后使用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb, SMARCB1/BAF47 (D8M1X) Rabbit mAb #91735 或 SS18 (D6I4Z) Rabbit mAb #21792 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。SMARCC1/BAF155、SMARCB1/BAF47 和 SS18 均为 SWI/SNF 复合体的所有亚基。结果图显示了 pS2/TFF1 内结合，pS2/TFF1 是一种已知的 SWI/SNF 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    对来自 NCCIT 细胞提取物的 Brg1 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% input，泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，而泳道 3 是 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb。使用 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 Brg1 (D1Q7F) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用 SimpleChIP® Human HoxA1 Intron 1 Primers #7707、SimpleChIP® Human HoxA2 Promoter Primers #5517 和 human ITM2A upstream primers 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经无酚红培养基和 5% 炭剥离的 FBS 中培养 4 天，随后用 β-雌二醇（100 nM）持续处理 45 分钟的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 PBRM1/BAF180 (E9X2Z) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 ​后，进行染色质免疫沉淀分析。使用 Human ESR1 Intron 1 Primers、SimpleChIP® Human CCND1 Promoter Primers #12531 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在无酚红的培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 4 天，然后使用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb, SMARCB1/BAF47 (D8M1X) Rabbit mAb #91735 或 SS18 (D6I4Z) Rabbit mAb #21792 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。SMARCC1/BAF155、SMARCB1/BAF47 和 SS18 均为 SWI/SNF 复合体的所有亚基。结果图显示在染色体21（上图）内的结合，包括 SWI/SNF 复合体的已知靶标基因 pS2/TFF1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 MDA-MB-231（左）和 SW620（右）细胞团进行免疫组织化学分析。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中培养 4 天，然后用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 Brg1 (D1Q7F) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina®(ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示整个 ENSA 基因范围的结合作用。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在无酚红的培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 4 天，然后使用 β-雌二醇（10 nM，45分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ESR1 Promoter Primers #9673、SimpleChIP® Human pS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中培养 4 天，然后用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 Brg1 (D1Q7F) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina®(ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 ESR1（上图）内的结合，包括 Brg1 的已知靶基因 （参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）和 ENSA 基因。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过 NCCIT 细胞和 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。图形显示在 Sox2 内结合，Sox2 是一种已知的 SMARCC1 靶标基因（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他图形）。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中培养 4 天，随后用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 Brg1 (D1Q7F) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ESR1 Promoter Primers #9673、SimpleChIP® Human pS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过 NCCIT 细胞和 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 3（上图）内的结合，包括 SMARCC1 的已知靶标基因 Sox2（下图）（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    PBAF Complex Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，NCCIT 细胞和 SMARCC1/BAF155 (D7F8S) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362进行 CUT&RUN。使用 SimpleChIP® Human Oct-4 Promoter Primers #4641、SimpleChIP® Human Sox2 Promoter Primers #4649 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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