Revision 1

#4750Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody 2606 20 µl 61 to 67 (PAK2), 68 to 74 (PAK1/3) kDa Rabbit 
Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody 2605 20 µl 61 to 67 (PAK2), 68 to 74 (PAK1/3) kDa Rabbit 
Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody 2601 20 µl 61 to 67 (PAK2), 68 to 74 (PAK1/3) kDa Rabbit 
Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody 2607 20 µl 61 to 67 kDa Rabbit 
PAK1 Antibody 2602 20 µl 68 kDa Rabbit 
PAK2 (C17A10) Rabbit mAb 2615 20 µl 61 kDa Rabbit IgG
PAK3 Antibody 2609 20 µl 65 kDa Rabbit 
PAK1/2/3 Antibody 2604 20 µl 61 (PAK2), 68 (PAK1/3) kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The PAK antibody sampler kit provides and economical means to evaluate the activation status of PAK1, 2, and 3. This kit includes enough primary and secondary antibodies to perform two western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The p21-activated kinase (PAK) family of serine/threonine kinases is engaged in multiple cellular processes, including cytoskeletal reorganization, MAPK signaling, apoptotic signaling, control of phagocyte NADPH oxidase and growth factor-induced neurite outgrowth (1,2). Several mechanisms that induce PAK activity have been reported. Binding of Rac/cdc42 to the CRIB (or PBD) domain near the amino terminus of PAK causes autophosphorylation and conformational changes in PAK (1). Phosphorylation of PAK1 at Thr423 by PDK induces activation of PAK1 (3). Several autophosphorylation sites have been identified, including serines 199 and 204 of PAK1 and serines 192 and 197 of PAK2 (4,5). Because the autophosphorylation sites are located in the amino-terminal inhibitory domain, it has been hypothesized that modification in this region prevents the kinase from reverting to an inactive conformation (6). Research indicates that phosphorylation of Ser144 of PAK1 or Ser139 of PAK3 (located in the kinase inhibitory domain) affects kinase activity (7). Phosphorylation of Ser21 of PAK1 or Ser20 of PAK2 regulates binding with the adaptor protein Nck (8).

  1. Knaus, U.G. and Bokoch, G.M. (1998) Int J Biochem Cell Biol 30, 857-62.
  2. Daniels, R.H. et al. (1998) EMBO J 17, 754-64.
  3. King, C.C. et al. (2000) J Biol Chem 275, 41201-9.
  4. Manser, E. et al. (1997) Mol Cell Biol 17, 1129-43.
  5. Gatti, A. et al. (1999) J Biol Chem 274, 8022-8.
  6. Lei, M. et al. (2000) Cell 102, 387-97.
  7. Chong, C. et al. (2001) J Biol Chem 276, 17347-53.
  8. Zhao, Z.S. et al. (2000) Mol Cell Biol 20, 3906-17.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    Revision 1
    #4750

    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit

    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody 对已经 1 µM fMLP 刺激规定时间的豚鼠嗜中性粒细胞的提取物进行蛋白质印迹分析(组织由马萨诸塞州哈佛大学医学院生物化学和分子药理学科的 Qian Zhan 和 John Badwey 博士惠赠)。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 PAK1 Antibody 对 SH-SY5Y、C6 和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 PAK1/2/3 Antibody 对 SH-SY5Y、C6 和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody 对已经 fMLP (1 µM) 刺激规定时间的豚鼠嗜中性粒细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody(上图)或 PAK1/2/3 Antibody #2604(下图),对共转染激活的 cdc42 和 GST-PAK2(泳道 1)、转染GST-PAK2(泳道 2)或激活的 cdc42(泳道 3)的 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。仅在共转染激活的 cdc42 时,该抗体方可识别 GST-PAK2 信号,表明该抗体具有磷酸特异性。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody(上图)或 PAK1/2/3 Antibody #2604(下图)对已经 fMLP 刺激规定时间的豚鼠嗜中性粒细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 PAK3 Antibody 对小鼠脑细胞提取物和重组 GST-PAK3 进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 PAK2 (C17A10) Rabbit mAb 对 293、C2C12 和 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody(上图)或 PAK2 Antibody(下图)对已经 0.4 M 山梨醇处理规定时间的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 PAK1 Antibody #2602 和 p42 MAP Kinase (Erk2) Antibody #9108 对转染 100 nM 对照 siRNA #6201 (-) 或 PAK1 siRNA 的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。PAK1 Antibody 确认 PAK1 表达沉默,而 p42 MAP Kinase (Erk2) Antibody 则用于观察上样量和 PAK1 siRNA 的特异性。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody(上图)和 PAK1/2/3 Antibody #2604(下图)对已经 fMLP 刺激规定时间的豚鼠嗜中性粒细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 PAK3 Antibody 对小鼠脑细胞提取物 PAK3 进行免疫沉淀后,再用 PAK3 Antibody(左图)、PAK1 Antibody #2602(中间)或 PAK2 Antibody #2608(右图)进行蛋白质印迹分析。
    PAK 1/2/3 Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 PAK1 Antibody 对 C6 和 SH-SY5Y 细胞的 PAK1 进行免疫沉淀后再进行蛋白质印迹分析。