Revision 1

#2903Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb 4858 20 µl 32 kDa Rabbit IgG
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb 5364 20 µl 32 kDa Rabbit IgG
Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody 3591 20 µl 80 kDa Rabbit 
Phospho-eEF2k (Ser366) Antibody 3691 20 µl 105 kDa Rabbit 
Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (108D2) Rabbit mAb 9234 20 µl 70, 85 kDa Rabbit IgG
p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb 2708 20 µl 70, 85 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

The p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit provides a fast and economical means of evaluating several substrates of p70 S6 Kinase. The kit contains enough primary and secondary antibody to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

p70 S6 kinase is a mitogen activated Ser/Thr protein kinase that is required for cell growth and G1 cell cycle progression (1,2). p70 S6 kinase phosphorylates the S6 protein of the 40S ribosomal subunit and is involved in translational control of 5' oligopyrimidine tract mRNAs (1). Important S6 ribosomal protein phosphorylation sites include several residues (Ser235, Ser236, Ser240, Ser244) located wtihin a small, carboxy-terminal region of the S6 protein (3,4). p70 S6 kinase has been shown to phosphorylate eIF4B at the rapamycin-sensitive site Ser422 in vivo, and a Ser422Ala mutant of eIF4B shows diminished activity in an in vitro translation assay (5). Phosphorylation of eEF2K by p70 S6 kinase and p90RSK leads to inactivation of eEF2K (6), facilitating the dephosphorylation of eEF2 and thus promoting translation.

  1. Pullen, N. and Thomas, G. (1997) FEBS Lett 410, 78-82.
  2. Dufner, A. and Thomas, G. (1999) Exp Cell Res 253, 100-9.
  3. Ferrari, S. et al. (1991) J Biol Chem 266, 22770-5.
  4. Flotow, H. and Thomas, G. (1992) J Biol Chem 267, 3074-8.
  5. Raught, B. et al. (2004) EMBO J 23, 1761-9.
  6. Wang, X. et al. (2001) EMBO J 20, 4370-9.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #2903

    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit

    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse hippocampus, untreated (left) or post-processed with λ phosphatase (middle), using Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (green) and, untreated (right), using S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb #2217 (green) and ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue).
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of fixed frozen mouse pancreas, untreated (left) or post-processed with λ phosphatase (right), using Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (green), DyLight™ 554 Phalloidin #13054 (red), and ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (blue).
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb #4858 对经过人 IGF-1（100 ng/mL，10 分钟）处理的血清饥饿 MCF-7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image

    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb #5364 对经过 hIGF-1（100 ng/mL，10 分钟）处理的血清饥饿的 MCF-7 细胞裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (108D2) Rabbit mAb #9234 对经过 hIGF-1（100 ng/mL，10 分钟）处理的血清饥饿 MCF-7 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道视图（左图）显示对应于磷酸化 p85 S6 激酶 (Thr412)（如图所示）在一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）和一个条带。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11)XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同人细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody（上图）或 eIF4B Antibody #3592（下图），对 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。在转染 siRNA 48 小时后，按规定用雷帕霉素 (50 nM) 和 U0126 (10 µM) 对细胞进行处理。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-eEF2k (Ser366) Antibody（上图）或 eEF2k Antibody #3692（下图），对已经小牛肠道碱性磷酸酶 (CIP) 或 20% 胎牛血清处理 30 分钟的 SW-13 细胞（饥饿 18 小时）提取物以及经 200 nM TPA 处理 30 分钟的 HeLa 细胞（饥饿 18 小时）的提取物进行蛋白质印迹分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb（上图）或 S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb #2217（下图）对未经处理 (-) 或经过以下指定组合处理的血清饥饿的 MCF7 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析：human IGF-1（100 ng/mL，10 分钟）和 λ 磷酸酶。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb（上图）或 S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb #2217（下图），对按规定已经 100 nM 胰岛素（10 分钟）或 20% FBS（30 分钟）处理的 MCF7 和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（绿色）或已经过 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (108D2) Rabbit mAb（上），或 p70 S6 Kinase (49D7) rabbit mAb #2708 （下）对经血清饥饿或加有血清处理的 (20%) 293， NIH/3T3，和 PC12 细胞进行蛋白质印迹分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb #2708 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125， 对转染 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® p70/85 S6 Kinase siRNA I#6566 (+) 或 SignalSilence® p70/85 S6 Kinase siRNA II #6572 (+) 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb 确认 p70/85 S6 激酶表达沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则用作控制上样量和 p70/85 S6 激酶 siRNA 的特异性。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (S235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb 在 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101 上对未经处理（左图）或经 LY294002（右图）处理的石蜡包埋的 LNCaP 细胞）进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    在有对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）的情况下，使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb， 对石蜡包埋的小鼠结肠细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb， 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb， 对 SignalSlide® Phospho-Akt (Ser473) IHC Controls #8101（石蜡包埋的 LNCaP 细胞沉淀物 -/+ LY294002）进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb，对石蜡包埋的小鼠脾脏细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb， 对对照的（左图）或已经雷帕霉素处理（右图）的石蜡包埋的 LNCaP 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb， 对未经处理（左图）或经 λ 磷酸酶（右图）处理的石蜡包埋的 A549 异种移植物进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb， 对对照的（左图）或已经雷帕霉素处理的（右图）的石蜡包埋的 Rh30 异种移植物进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    在有对照肽（左图）或 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) Blocking Peptide #1220（右图）的情况下，使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb（绿色），对已经胰岛素（左图）和 LY294002（#9901，右图）处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb ，对未经处理（左图）或已经雷帕霉素（右图）处理的石蜡包埋的 LNCaP 细胞进行免疫组织化学分析。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal protein (Ser235/Ser236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb（绿色），对经雷帕霉素（左图）或 20% 血清（右图）处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    p70 S6 Kinase Substrates Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（绿色）或已经 LY294002 #9901、Wortmannin #9951 和 U0126 #9903（50 μM、1 μM 和 10 μM，2 小时；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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