Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#Q96CV9

Entrez-Gene Id:

10133

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb 31304 100 µl H M 75 Rabbit IgG
Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb 70928 100 µl H 75 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Optineurin is a signaling protein involved in maintenance of the Golgi complex, membrane trafficking, NF-κB, and interferon signaling. Mutations in the gene encoding optineurin have been associated with human diseases including glaucoma, Paget disease of bone, and amyotrophic lateral sclerosis (ALS) (1-2). Optineurin is thought to contribute to these pathologies through regulation of inflammatory signaling, autophagy, and mitophagy (1, 3). The NF-κB-activating kinase/TANK-binding kinase 1 (NAK/TBK1) phosphorylates optineurin at serine 177, regulating optineurin’s role in autophagy and mitophagy (4-6). The tumor suppressor HACE1 ubiquitylates optineurin, promoting the interaction of optineurin with the autophagy receptor p62/SQSTM1 (7).
Phosphorylation of optineurin at serine 177 by TBK1 enhances binding to LC3 and promotes autophagic clearance (8). Additional studies also suggest that serine 177 is phosphorylated during mitosis by PLK1 (9). In addition to serine 177, TBK1 also phosphorylates optineurin at serine 473 and 513, which can enhance its binding to ubiquitin chains and promote mitophagy (5,6).

  1. Ying, H. and Yue, B.Y. (2016) Exp Eye Res 144, 73-80.
  2. Slowicka, K. et al. (2016) Trends Immunol 37, 621-33.
  3. Markovinovic, A. et al. (2017) Prog Neurobiol 154, 1-20.
  4. Moore, A.S. and Holzbaur, E.L. (2016) Proc Natl Acad Sci U S A 113, E3349-58.
  5. Richter, B. et al. (2016) Proc Natl Acad Sci U S A 113, 4039-44.
  6. Heo, J.M. et al. (2015) Mol Cell 60, 7-20.
  7. Liu, Z. et al. (2014) Cancer Cell 26, 106-20.
  8. Wild, P. et al. (2011) Science 333, 228-33.
  9. Kachaner, D. et al. (2012) Mol Cell 45, 553-66.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

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    Revision 1
    #63617

    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带 Myc/DDK 标签的人视神经蛋白 (hOptineurin-Myc/DDK; +) 和带 GST 标签的人 IKK-ε (hIKK-ε-GST; +)(如图所示)的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对未经处理 (-) 或已经过羰基氰化物-3-氯苯腙(CCCP;100 μM,2小时; +)处理的 C2C12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    Western blot analysis of U20S extracts from WT (left) or OPTN KO (right) using Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb. 用 Ponceau S 染色的膜进行总蛋白标准化(下图)。这些数据由 YCharOS Inc. 提供,该公司是一家开放科学公司,作为 CST 科学家生成的验证数据的合作伙伴,其使命是表征市售抗体。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb(上图)或 Optineurin (D2L8S) Rabbit mAb #58981(下图)对经过羰基氰酯-3-氯苯基腙(CCCP;100 μM,2 小时)处理的 HDLM-2 细胞的提取物以及未经 (-) 或已经 λ 磷酸酶和牛小肠磷酸酶 (λPPase/CIP; +) 处理的裂解物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    对 ACHN 细胞提取物视神经蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb。使用 Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb(上图)、Optineurin (D2L8S) Rabbit mAb #58981(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经 (-) 或已经过羰基氰酯-3-氯苯基腙(CCCP;100 μM,2 小时;+)和/或 BX-795(1 μM, 2 小时;+)处理(如图所示)的 Capan-2 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb(绿色)对 HCC1187 细胞(左图,高表达)或 HCC1419 细胞(右图,低表达)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封片。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    对用羰基氰酯-3-氯苯基腙处理(CCCP;100 μM,2 小时)的 HDLM-2 细胞的 phospho-optineurin (Ser177) protein 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb。使用 Phospho-Optineurin (Ser177) (E8L9I) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    PhosphoPlus® Optineurin (Ser177) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Optineurin (E4P8C) Rabbit mAb (实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对LNCaP(克隆 FGC)细胞(蓝色)和 HDLM-2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。