Revision 1

#60125Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 27281 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb 14498 20 µl 40, 44 kDa Rabbit IgG
OAS2 (E2G4K) Rabbit mAb 24344 20 µl 70 kDa Rabbit IgG
OAS3 (E4X7Z) Rabbit mAb 74906 20 µl 120 kDa Rabbit IgG
OASL (E7W1R) Rabbit mAb 36845 20 µl 52 kDa Rabbit IgG
PDE12 (E2V7J) Rabbit mAb 88499 20 µl 75, 70 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting proteins involved in the OAS/RNase L pathway. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The 2'-5'-oligoadenylate synthetase (OAS)/RNase L pathway is a component of the antiviral innate immune system. The OAS family of proteins includes OAS1, OAS2, OAS3, and OASL in humans, all of which are induced in response to type 1 interferons (1-3). When activated by cytosolic double-stranded RNA, OAS1-3 generate 2’-5’-linked oligoadenylates that bind to and activate the ribonuclease, RNase L. Activated RNase L is poised to degrade viral and cellular RNA as part of the antiviral innate immune response (4). Unlike OAS1-3, OASL lacks intrinsic enzymatic activity, and research studies have suggested that OASL participates in the antiviral immune response independently of the canonical OAS/RNase L signaling pathway (5,6). Negative regulation of the OAS/RNase L pathway is governed, in part, by the PDE12 phosphodiesterase that degrades 2'-5'-oligoadenylates (7).

  1. Chebath, J. et al. Nature 330, 587-8.
  2. Schoggins, J.W. et al. (2011) Nature 472, 481-5.
  3. (2019) Proc Natl Acad Sci U S A 116, 12573.
  4. Dong, B. and Silverman, R.H. (1997) J Biol Chem 272, 22236-42.
  5. Marques, J. et al. (2008) J Gen Virol 89, 2767-2772.
  6. Ishibashi, M. et al. (2010) Biochem Biophys Res Commun 392, 397-402.
  7. Wood, E.R. et al. (2015) J Biol Chem 290, 19681-96.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #60125

    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit

    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image

    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb #14498 对 HT-29 + hIFN⍺ -1 (10ng/mL, O/N) + poly(I:C )(2.5µg/mL,7 小时)+ MG-132(10µM,7 小时)裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess Simple Western 仪器上进行该实验。

    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 OAS3 (E4X7Z) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。OAS3 蛋白在 293T细胞 和 Raji 细胞中阴性表达与预测的表达模式一致。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb (上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图),对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml,16 小时;+)处理的 HeLa、NCI-H460 和 HT-29 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 OAS2 (E2G4K) Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927(100 ng/ml,24 小时;+)处理的 HT-1080 和 A549 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 OASL (E7W1R) Rabbit mAb(上图)、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对空载转染 (-) 或经表达 Myc/DDK 标记的全长人 OASL 蛋白 (hOASL-Myc/DDK; +) 的构建体转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 OAS3 (E4X7Z) Rabbit mAb(上图)、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对空载转染 (-) 或经表达 Myc/DDK 标记的全长人 OAS3 蛋白 (hOAS3-Myc/DDK; +) 的构建体转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 PDE12 (E2V7J) Rabbit mAb 对来自各种人细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 OAS1 (D1W3A) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染表达人 OAS1 同工型 p41 (hOAS1 p41; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 OAS2 (E2G4K) Rabbit mAb(上图)、DYKDDDDK Tag Antibody #2368(中间)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对转染空载 (-) 或转染表达带 Myc/DDK 标签的全长人 OAS2 蛋白(hOAS2-Myc/DDK;+)的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 RNase L (D4B4J) Rabbit mAb 对未转染 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人 RNase L (hRNase L-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 OASL (E7W1R) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 PDE12 (E2V7J) Rabbit mAb 对来自各种人细胞系和小鼠细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对 NCI-H1650 细胞提取物 OAS2 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 OAS2 (E2G4K) Rabbit mAb。使用 OAS2 (E2G4K) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 OASL (E7W1R) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理 (-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 处理(100 ng/mL, 24小时;+)的 THP-1 细胞、HeLa 细胞和 A549 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 PDE12 (E2V7J) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对经对照 siRNA (-) 或 PDE12 siRNA (+) 转染的 293T 细胞的 提取物进行蛋白质印迹分析。
    OAS/RNase L Pathway Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 PDE12 (E2V7J) Rabbit mAb(上图)、DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb #14793(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图),对空载转染 (-) 或经表达 Myc/DDK 标记的全长人 PDE12 (hPDE12-Myc/DDK; +) 的构建体转染的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。