Revision 2

#8595Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
RARα (E6Z6K) Rabbit mAb 62294 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb 8965 20 µl 58 kDa Rabbit IgG
RXRα (D6H10) Rabbit mAb 3085 20 µl 53 kDa Rabbit IgG
Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb 3660 20 µl 80, 91, 94 kDa Rabbit IgG
Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 8757 20 µl 90 (PR-A), 118 (PR-B) kDa Rabbit IgG
Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 5153 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 8644 20 µl 66 kDa Rabbit IgG
PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 2435 20 µl 53, 57 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the presence and status of nuclear receptors. This kit contains enough primary antibody to perform two western blots per primary.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Nuclear Receptors are transcription factors responsible for sensing bioactive molecules, including steroid and thyroid hormones. They are regulated by multiple posttranslational modifications, which in turn impacts their ability to regulate the expression of specific genes involved in the control of reproduction, development, and metabolism.

Androgen receptor (AR), a zinc finger transcription factor belonging to the nuclear receptor superfamily, is activated by phosphorylation and dimerization upon ligand binding (1). This promotes nuclear localization and binding of AR to androgen response elements in androgen target genes. AR plays a crucial role in several stages of male development and the progression of prostate cancer (2,3).

Estrogen receptor α (ERα), a member of the steroid receptor superfamily, contains highly conserved DNA binding and ligand binding domains (4). Through its estrogen-independent and estrogen-dependent activation domains (AF-1 and AF-2, respectively), ERα regulates transcription by recruiting coactivator proteins and interacting with general transcriptional machinery (5).

Glucocorticoid hormones control cellular proliferation, inflammation, and metabolism through their association with the glucocorticoid receptor (GR)/NR3C1, a member of the nuclear hormone receptor superfamily of transcription factors (6).

Peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) is a member of the ligand-activated nuclear receptor superfamily and functions as a transcriptional activator (7). PPARγ is preferentially expressed in adipocytes, as well as in vascular smooth muscle cells and macrophages (8). Besides its role in mediating adipogenesis and lipid metabolism (8), PPARγ also modulates insulin sensitivity, cell proliferation, and inflammation (9).

Human progesterone receptor (PR) is expressed as two forms: the full length PR B and the short form PR A. PR A lacks the first 164 amino acid residues of PR B (10,11). Both PR A and PR B are ligand activated, but differ in their relative ability to activate target gene transcription (12,13).

Nuclear retinoic acid receptors (RARs) consist of three subtypes encoded by separate genes: α (NR1B1), β (NR1B2), and γ (NR1B3). For each subtype, there are at least two isoforms, which are generated by differential promoter usage and alternative splicing and differ only in their N-terminal regions. Retinoids, which are metabolites of vitamin A, serve as ligands for RARs (14). RARs function as ligand-dependent transcriptional regulators and are found to be heterodimerized with retinoid X receptors (RXRs). These transcriptionally active dimers regulate the expression of genes involved in cellular differentiation, proliferation, and apoptosis (15,16).

The human retinoid X receptors are encoded by three distinct genes (RXRα, RXRβ, and RXRγ) and bind selectively and with high affinity to the vitamin A derivative, 9-cis-retinoic acid. RXRs are type-II nuclear hormone receptors that are largely localized to the nuclear compartment independent of ligand binding. Nuclear RXRs form heterodimers with nuclear hormone receptor subfamily 1 proteins, including thyroid hormone receptor, retinoic acid receptors, vitamin D receptor, peroxisome proliferator-activated receptors, liver X receptors, and farnesoid X receptor (17).

  1. Li, J. and Al-Azzawi, F. (2009) Maturitas 63, 142-8.
  2. Avila, D.M. et al. (2010) J Steroid Biochem Mol Biol 76, 135-42.
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  10. Evans, R.M. (1988) Science 240, 889-95.
  11. Kastner, P. et al. (1990) EMBO J 9, 1603-14.
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  17. Gronemeyer, H. et al. (2004) Nat Rev Drug Discov 3, 950-64.

Background References

    Trademarks and Patents

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    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    Revision 2
    #8595

    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit

    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对 NIH/3T3 和 3T3-L1 细胞(分化 6 天成为脂肪细胞)的提取物进行蛋白印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对未分化(左)或已分化(右)的 3T3-L1 细胞进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠褐色脂肪进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用在分化细胞中显示胞核定位的 PPARγ (C26H12A8) Rabbit mAb(红色)对 3T3-L1 进行共聚焦免疫荧光分析。用 BODIPY 493/503(绿色)标记脂肪滴。蓝色伪彩 = DRAQ5 (DNA 荧光染料)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb(下图)对 LNCaP (AR+)、VCaP (AR & AR-V7+)、22Rv1 (AR & AR-V7+) 和 PC-3 (AR-) 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb #5153 对 LNCaP 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb #8644 对 MCF7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 文库。该图显示结合遍及 FOXN3(PPARγ 的已知靶标基因) 。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 RXRα (D6H10) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb(上)和 DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) #2368(下),对转染空载 (-) 或转染带有 Myc/DDK 标签的全长人糖皮质激素受体 α (hGRα-Myc/DDK, +) 或带有 Myc/DDK 标签的全长人盐皮质激素受体 (hMR-Myc/DDK, +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb #3660(绿色)、DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)和 DAPI #4083(蓝色)对 HeLa 细胞(左图,阳性)或 HT-29 细胞(右图,阴性)进行共聚焦免疫荧光分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb(上图)和 β-Actin Antibody #4967(下图)对 LNCaP (AR+)、MCF7 (AR+)、PC-3 (AR-) 和 DU 145 (AR-) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮(DHT,10 nM)处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内的结合(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 RARα (E6Z6K) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行的蛋白质印迹法分析。NB-4 细胞系包含 PML-RARα 融合蛋白。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 ,采用在无酚红培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中培育 4天后,经 β-雌二醇(10 nM)处理 45 分钟的 MCF7 细胞的交联型染色质以及 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。图形显示在 TFF1/pS2 内结合,TFF1/pS2 是一种已知的雌激素受体 α 的靶基因(参见含有 ChIP-qPCR 数据的其他图形)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对内质网阳性细胞系(MCF7、T-47D、ZR-75-1)和内质网阴性细胞系(SK-BR-3 和 MCF 10A) 提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用CUT&RUNcaica Assay Kit #86652,采用在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中 4 天培育后经 β 雌二醇(10 nM)处理 45 分钟的 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor a (D8H8) Rabbit mAb 或 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb #13258 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示贯穿 TFF1 基因的结合作用。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对 T-47D(PR 阳性)和 MDA-MB-231(PR 阴性)细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素(R5020,10 nM,1 小时)处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 SETD9 基因。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 文库。该图显示结合遍及染色体 14(上图),包括 FOXN3( PPARγ 的已知靶标基因)(下图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 RXRα (D6H10) Rabbit mAb (上图)和 DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) #2368(下图),对转染空载 (-) 或转染能编码全长人 RXRα (hRXRα; +)、RXRβ (hRXRβ; +) 或 RXRγ (hRXRγ; +) 的带有 Myc/DDK 标签的 cDNA 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 LNCaP(AR+,左图)和 DU145(AR-,右图)进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮(DHT,10 nM)处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了染色体 19(上图)内的结合,包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    对来自 NB-4 细胞提取物的 RARα 和 PML-RARα 进行的免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 RARα (E6Z6K) Rabbit mAb。使用 RARα (E6Z6K) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。NB-4 细胞系包含 PML-RARα 融合。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 ,采用在无酚红培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中培育 4天,,然后经 β-雌二醇(10 nM)处理 45 分钟的 MCF7 细胞的交联型染色质以及 5 μl Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在染色体 21(上图)内的结合,包括 Estrogen Receptor α 的已知靶标基因 TFF1/pS2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用CUT&RUNcaica Assay Kit #86652,采用在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中 4 天培育后经 β 雌二醇(10 nM)处理 45 分钟的 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor a (D8H8) Rabbit mAb 或 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb #13258 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示贯穿染色体 21(上图)(包括 TFF1 基因(下图))的结合作用。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图),对在添加了 5% 活性炭剥离 FBS 的无酚红培养基中生长 48 小时,然后经赋形剂对照物 (-) 或普美孕酮(R5020,100 nM,16小时;+)处理的 T-47D 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。用 R5020 长时间处理表达 PR 的细胞已知会诱导 PR 表达下调和过度磷酸化,这表现为在 SDS-PAGE 上的迁移变慢。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素(R5020,10 nM,1 小时)处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及染色体 5(上图),包括 SETD9(下图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb, 对转染空载 (-) 或转染能编码全长人 RARγ1 的带有 Myc/DDK 标签的 cDNA 表达载体 (hRARγ1-Myc/DDK, +) 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 HDLM-2 细胞的交联染色质与 PPARγ (C26H12) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human FOXN3 Intron 3 Primers #95568、human STON2 intron 4 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经维生素 D (10 nM) 处理 3 小时的 LS-180 细胞的交联染色质与 RXRα (D6H10) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 一起进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human c-Fos Upstream Primers #25661、human UCA1 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb #3660(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对对照 HeLa 细胞(泳道 1)或糖皮质激素受体敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。糖皮质激素受体敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对糖皮质激素受体的特异性。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #66362,对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮(DHT,10 nM)处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时聚合酶链反应 (PCR) 对富集 DNA 进行量化分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对在无酚红的培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中生长4天,然后使用 β-雌二醇(10 nM,45 分钟)处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质,在加入 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG#2729 后,进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ESR1 Promoter Primers #9673、SimpleChIP® Human pS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,采用在无酚红培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 中培育 4 天 ,然后经 β-雌二醇(10 nM )处理 45 分钟 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® Human PS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 定量富集的 DNA。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺浸润性导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素(R5020,10 nM,1 小时)处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 TBL2 启动子引物和人 OCM2 外显子 1 引物,通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HaCaT (阳性,左图)和 Hep3B (阴性,右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb(绿色),对 LNCaP(阳性,左)和 DU145(阴性,右)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 44 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 T-47D (高 PR,左图)、MCF-7 (低 PR,中间)和 MDA-MB-231 (PR 阴性,右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 45 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 46 Expand Image
    使用 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 HT-29 细胞(蓝色,阴性)和 HeLa 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 47 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 DU-145 细胞(蓝色)和 LNCaP 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 48 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NB-4 细胞的交联染色质与 RARα (E6Z6K) Rabbit mAb #62294 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human RUNX1 Exon 2 Primers #67254、人 GFI 启动子引物、人 GFI 外显子4引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 49 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人皮肤细胞进行免疫组织化学分析。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 50 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb(绿色),对 T-47D(PR 阳性,左图)和 MDA-MB-231 (PR 阴性,右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 51 Expand Image
    使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb(绿色),对 HaCaT 细胞 (阳性,左图)和 Hep3B 细胞(阴性,右图)进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 52 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 3 天,然后经 Dexamethasone 处理(100 nM 1 小时)的 A549 细胞中提取的交联染色质,在加入 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb 后,进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示在 SLC19A2 内结合,SLC19A2 是一种已知的 GR 靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图形)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 53 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天,随后用双氢睾酮 (DHT,10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 54 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 MDA-MB-231 细胞(蓝色,阴性)和 T47D 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 55 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(红色)作为对照,使用 RARγ1 (D3A4) XP® Rabbit mAb(蓝色)对 T-47D 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 56 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 3 天,然后经 Dexamethasone 处理(100 nM 1 小时)的 A549 细胞中提取的交联染色质,在加入 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb 后,进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 (上图)内的结合,包括 GR 的已知靶基因 SLC19A2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 57 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天,随后用双氢睾酮 (DHT,10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示了染色体 19(上图)内的结合,包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 58 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 48 小时,然后经普美孕酮(R5020, 10 nM, 1 小时)处理的 T-47D 细胞中提取的染色质,在加入 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 后,进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在 FKBP5/FKBP51 内结合,FKBP5/FKBP51 是 Progesterone Receptor A/B 的一个已知靶标基因(见其他含 ChIP-qPCR 数据的图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 59 Expand Image
    A549 细胞在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 3 天,然后不进行处理(左小图)或用地塞米松处理(100 nM,1 小时;右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞中提取的交联染色质在加入 Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human SLC19A2 Promoter Primers #7681、human MT2A promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 60 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对在无酚红培养基和 5% 炭剥离的 FBS 中培养 3天,随后用 双氢睾酮(DHT,10 nM)处理 4 小时的 LNCaP 细胞中提取的交联染色质,在加入 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后,进行染色质免疫沉淀。使用 using SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086, SimpleChIP® Human KLK3 Promoter Primers #32784 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486, 通过实时 PCR 对富集 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 61 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 48 小时,然后经普美孕酮(R5020, 10 nM, 1 小时)处理的 T-47D 细胞中提取的染色质,在加入 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 后,进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示了染色体 6(上图)内的结合,包括雄激素受体 A/B 的已知靶基因 FKBP5/ FKBP51(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Nuclear Receptor Antibody Sampler Kit: Image 62 Expand Image
    T-47D 细胞在添加了 5% 活性炭剥离 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时,然后不进行处理(左小图)或用普美孕酮处理(R5020,10 nM,1 小时;右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞的交联染色质与 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human FKBP51 Intron 5 Primers #7859、human E2F-1 proximal enhancer site #1 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。