Revision 2

#3640Store at -20C

1 个试剂盒

(4 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb 4147 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 3608 20 µl 120, 300 kDa Rabbit IgG
Notch3 (D11B8) Rabbit mAb 5276 20 µl 90, 270 kDa Rabbit IgG
Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 5732 20 µl 110, 300 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Notch Isoform Antibody Sampler Kit provides an economical means to investigate Notch Signaling. The kit contains primary and secondary antibodies to perform two western mini-blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Notch proteins (Notch1-4) are a family of transmembrane receptors that play important roles in development and the determination of cell fate (1). Mature Notch receptors are processed and assembled as heterodimeric proteins, with each dimer comprised of a large extracellular ligand-binding domain, a single-pass transmembrane domain, and a smaller cytoplasmic subunit (Notch intracellular domain, NICD) (2). Binding of Notch receptors to ligands of the Delta-Serrate-Lag2 (DSL) family triggers heterodimer dissociation, exposing the receptors to proteolytic cleavages; these result in release of the NICD, which translocates to the nucleus and activates transcription of downstream target genes (3,4).
Constitutively activated Notch1 signaling is associated with the majority of cases of T cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). The activation is either due to mutations in Notch1 itself or in the components of ubiquitin ligase complex, namely FBW7 (5-6). Notch2 is a member of the Notch family and mutation in Notch2 is associated with Alagille syndrome (7). Notch3 is a member of the Notch family and is processed similar to Notch1 (8). It is expressed primarily in arterial smooth muscle cells (SMC). Mutations altering the number of cysteine residues in the notch3 extracellular region are associated with cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy (CADASIL), a hereditary angiopathy leading to strokes and dementia in adults (9-11). Recent studies indicate that Notch3 is overexpressed in many types of cancer (12-14).

  1. Artavanis-Tsakonas, S. et al. (1999) Science 284, 770-6.
  2. Chan, Y.M. and Jan, Y.N. (1998) Cell 94, 423-6.
  3. Schroeter, E.H. et al. (1998) Nature 393, 382-6.
  4. Rand, M.D. et al. (2000) Mol Cell Biol 20, 1825-35.
  5. Weng, A.P. et al. (2004) Science 306, 269-71.
  6. Thompson, B.J. et al. (2007) J Exp Med 204, 1825-35.
  7. McDaniell, R. et al. (2006) Am J Hum Genet 79, 169-73.
  8. Baron, M. (2003) Semin Cell Dev Biol 14, 113-9.
  9. Kalimo, H. et al. (2002) Brain Pathol 12, 371-84.
  10. Karlström, H. et al. (2002) Proc Natl Acad Sci U S A 99, 17119-24.
  11. Monet, M. et al. (2007) Hum Mol Genet 16, 982-92.
  12. Park, J.T. et al. (2006) Cancer Res 66, 6312-8.
  13. Gramantieri, L. et al. (2007) Liver Int 27, 997-1007.
  14. Yamaguchi, N. et al. (2008) Cancer Res 68, 1881-8.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Revision 2
    #3640

    Notch Isoform Antibody Sampler Kit

    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对不同细胞类型的总细胞提取物进行蛋白质印迹分析。全长 (FL) Notch 蛋白和裂解的跨膜/胞内区 (NTM) 如图所示。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb(上)或 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb #3608(下),对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Notch3 (D11B8) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对 293 和 SK-MEL-5 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。全长 (FL) Notch2 蛋白和跨膜/胞内区 (NTM) 如图所示。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human serous papillary carcinoma of the ovary using Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb performed on the Leica BOND RX.
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人炎症肉芽组织进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    将 CUTLL1 细胞在含有 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基中培养 3 天,随后立即收集(左小图)或洗涤后在新鲜培养基中培养 3 小时(右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞的交联染色质和 Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用人 HES1 启动子引物、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human papillary thyroid carcinoma using Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb performed on the Leica BOND RX.
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human non-Hodgkin lymphoma using Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb performed on the Leica BOND RX.

    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 A2780(左图)、Jurkat(中图)和 RL(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。A2780 和 Jurkat 均表达 Notch1,但仅 Jurkat 细胞具有裂解的 Notch1,而 RL 细胞的 Notch1 表达水平较低或不表达 Notch1。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded normal human placenta using Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb performed on the Leica BOND RX.
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 MALT(黏膜相关淋巴组织)淋巴瘤周围的人胃细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺导管癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    在含 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基中培养 CUTLL1 细胞 3 天,随后立即收取(左小图)或洗涤并在新鲜培养基中培养 3 小时(右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞中提取的交联染色质,在加入 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用人 HES1 启动子引物、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金氏淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人胎盘组织进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人睾丸进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb(上图)或 Notch2 Rabbit mAb(下图)对石蜡包埋的人前列腺腺癌(左图)或子宫内膜样腺癌(右图)进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 Notch2 上的独立、独特表位。两个表位都包含在胞内域内,核染色代表活性 Notch2。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb(绿色)对 SNB19 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(右图)作为对照,使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb(左图)对石蜡包埋的人浆液性乳头状癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb,对固定和通透的 SW620 细胞(红色,低表达)和 293 细胞(蓝色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Notch Isoform Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Notch2 (D76A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物(左图,阳性)或 IMR-32 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。