Revision 2

#68309Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 3608 20 µl 120, 300 kDa Rabbit IgG
Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb 4147 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 5313 20 µl 61 kDa Rabbit IgG
MAML1 (D3K7B) Rabbit mAb 12166 20 µl 130 kDa Rabbit IgG
c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 5605 20 µl 57-65 kDa Rabbit IgG
p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 2947 20 µl 21 kDa Rabbit IgG
HES1 (D6P2U) Rabbit mAb 11988 20 µl 30 kDa Rabbit IgG
Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAb 2936 20 µl 31 kDa Mouse IgG1
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting target proteins of activated Notch. The kit contains enough primary antibody to perform four western blot experiments per primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Notch proteins (Notch1-4) are a family of transmembrane receptors that play important roles in development and the determination of cell fate (1). Mature Notch receptors are processed and assembled as heterodimeric proteins, with each dimer comprised of a large extracellular ligand-binding domain, a single-pass transmembrane domain, and a smaller cytoplasmic subunit (Notch intracellular domain, NICD) (2). Binding of Notch receptors to ligands of the Delta-Serrate-Lag2 (DSL) family triggers heterodimer dissociation, exposing the receptors to proteolytic cleavages; these result in release of the NICD, which translocates to the nucleus and activates transcription of downstream target genes (3,4).  RBPSUH (Recombining Binding Protein, SUppressor of Hairless), is the DNA-binding component of the transcription complex regulated by canonical Notch signaling. Binding of Notch with RBPSUH activates a transcription activation complex that includes Mastermind-like (MAML) proteins, leading to transcriptional activation of Notch target genes (5-7). The NICD binds and activates c-Myc which functions as a transcriptional regulator with roles in various aspects of cell behavior including proliferation, differentiation and apoptosis (8).  The tumor suppressor protein p21 Waf1/Cip1 acts as an inhibitor of cell cycle progression. The NICD-RBPSUH complex binds and activates p21 for transcription (15).  HES1 (Hairy and Enhancer of Split 1) is one of seven members of the HES family of basic helix-loop-helix (bHLH) transcription factors that is particularly well known as a repressive mediator of the canonical Notch signaling pathway (10). HES1 plays a key role in mediating Notch-dependent T cell lineage commitment (11), and has been reported to be an essential mediator of Notch-induced T cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) (11,12). The active complex of cyclin D/CDK4 targets the retinoblastoma protein for phosphorylation, allowing the release of E2F transcription factors that activate G1/S-phase gene expression (13).  Transcription of cyclin D is in part regulated by the NICD binding to the promoter region of cyclin D (14).

  1. Artavanis-Tsakonas, S. et al. (1999) Science 284, 770-6.
  2. Chan, Y.M. and Jan, Y.N. (1998) Cell 94, 423-6.
  3. Schroeter, E.H. et al. (1998) Nature 393, 382-6.
  4. Rand, M.D. et al. (2000) Mol Cell Biol 20, 1825-35.
  5. Wu, L. et al. (2002) Mol Cell Biol 22, 7688-700.
  6. Lin, S.E. et al. (2002) J Biol Chem 277, 50612-20.
  7. Kitagawa, M. et al. (2001) Mol Cell Biol 21, 4337-46.
  8. Baudino, T.A. and Cleveland, J.L. (2001) Mol Cell Biol 21, 691-702.
  9. Flores-Rozas, H. et al. (1994) Proc Natl Acad Sci U S A 91, 8655-9.
  10. Kobayashi, T. and Kageyama, R. (2010) Genes Cells 15, 689-98.
  11. Wendorff, A.A. et al. (2010) Immunity 33, 671-84.
  12. Espinosa, L. et al. (2010) Cancer Cell 18, 268-81.
  13. Lukas, J. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 6917-25.
  14. Li, X. and von Boehmer, H. (2011) ISRN Hematol 2011, 921706.
  15. Niimi, H. et al. (2007) J Cell Biol 176, 695-707.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 2
    #68309

    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit

    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb #2947 对 MCF-7 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb #5605 对 Raji 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 HES1 (D6P2U) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 MAML1 (D3K7B) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAb 对 SK-N-MC、C6 和 IMCD3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对对照的 HeLa 细胞(泳道 1)或 p21 Waf1/Cip1 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)进行蛋白印迹分析。p21 Waf1/Cip1 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 p21 Waf1/Cip1 的特异性。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对不同细胞类型的总细胞提取物进行蛋白质印迹分析。全长 (FL) Notch 蛋白和裂解的跨膜/胞内区 (NTM) 如图所示。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb(上)或 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb #3608(下),对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb Antibody, #5605 (上图)或β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照 HEK293 细胞(泳道 1)或 c-Myc 敲除型 HEK293 细胞(泳道2)提取物进行蛋白质印迹法分析。c-Myc 敲除型 HEK293 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Myc 的特异性。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*,它可在酶催化的分解期间发光。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 HES1 (D6P2U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 MAML1 (D3K7B) Rabbit mAb(泳道 3)对 293T 细胞提取物 MAML1 蛋白进行免疫沉淀法分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 MAML1 Antibody #4608 进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对不同细胞类型的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人炎症肉芽组织进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    将 CUTLL1 细胞在含有 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基中培养 3 天,随后立即收集(左小图)或洗涤后在新鲜培养基中培养 3 小时(右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞的交联染色质和 Cleaved Notch1 (Val1744) (D3B8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用人 HES1 启动子引物、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对转染空载或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 HES1 (D6P2U) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对用含 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基培养 3 天,随后用新鲜培养基洗涤和培养 3 小时的 CUTLL1 细胞的交联染色质与 MAML1 (D3E9) 兔单克隆抗体 #11959 或 MAML1 (D3K7B) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 MAML1 的已知靶基因 DTX1 内结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb #2947 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 ,对 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® p21 Waf1/Cip1 siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 确认 p21 Waf1/Cip1 表达的沉默,而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 用作 p21 Waf1/Cip1 siRNA 的上样和特异性对照。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    在有对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)的情况下,使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 HES1 (D6P2U) Rabbit mAb 对对照物(左)或经化合物 E (右)处理的石蜡包埋的 CUTLL1 细胞团进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对用含 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基培养 3 天,随后用新鲜培养基洗涤和培养 3 小时的 CUTLL1 细胞的交联染色质与 MAML1 (D3E9) 兔单克隆抗体 #11959 或 MAML1 (D3K7B) 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 12(上图)内的结合,包括 MAML1 的已知靶基因 DTX1(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 的 p21 进行免疫沉淀。使用相同的抗体进行蛋白质印迹检测。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 A2780(左图)、Jurkat(中图)和 RL(右图)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。A2780 和 Jurkat 均表达 Notch1,但仅 Jurkat 细胞具有裂解的 Notch1,而 RL 细胞的 Notch1 表达水平较低或不表达 Notch1。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺 E18.5、Rbpjk F/+ Shh+/+(野生型,左图)或 Rbpjk F/- Shhcre/+(有条件地敲除 Rbpjk,右图)进行免疫组织化学分析。请注意,有条件敲除组织中的支气管上皮细胞缺少染色(右图)。组织由波士顿大学医学院的 Wellington Cardosa 博士惠赠。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb(绿色)对转染空载(左图)或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染(右图)的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 DY-554 Phalloidin(红色)标记。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    CUTLL1 在含 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基中培养 3 天,随后清洗并在新鲜培养基中培养 3 小时。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对处理的 CUTLL1 细胞中提取的交联染色质,在加入 MAML1 (D3K7B) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀分析。使用 Human DTX1 Intron 3 Primers、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 MALT(黏膜相关淋巴组织)淋巴瘤周围的人胃细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb,对 SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568(左)或 SignalSilence® p21 Waf1/Cip1 siRNA II #6558(右)转染的石蜡包埋 HeLa 细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    在含 γ-分泌酶抑制剂 (1 μM) 的培养基中培养 CUTLL1 细胞 3 天,随后立即收取(左小图)或洗涤并在新鲜培养基中培养 3 小时(右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞中提取的交联染色质,在加入 Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用人 HES1 启动子引物、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠淋巴结细胞进行免疫组织化学分析。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb(红色)和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706(绿色)对 MCF7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    在含 γ-分泌酶抑制剂(1 μM,3 天)的培养基中培养 CUTLL1 细胞,随后立即采收(左小图)或洗涤,并在新鲜培养基中培养 3 小时(右小图)。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对细胞中提取的交联染色质,在加入 RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用人 HES1 启动子引物、SimpleChIP® Human HES4 Promoter Primers #7273 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
    Notch Activated Targets Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(左图)作为对照,使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb(右图)和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Daudi 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。