Revision 1

#78551Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb 29271 20 µl 16 kDa Rabbit IgG
p21 Waf1/Cip1 (E2R7A) Rabbit mAb 37543 20 µl 21 kDa Rabbit IgG
Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 9718 20 µl 15 kDa Rabbit IgG
Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 17416 20 µl 68, 45 kDa Rabbit IgG
HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 6893 20 µl 29 kDa Rabbit IgG
IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb 12912 20 µl 24 kDa Rabbit IgG
TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb 11948 20 µl 17,25,28 kDa Rabbit IgG
MMP-2 (D2O4T) Rabbit mAb 87809 20 µl 64,72 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting multiple markers of cellular senescence in mouse samples. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Senescence is characterized by stable stress-induced proliferative arrest and resistance to mitogenic stimuli, as well as the secretion of proteins such as cytokines, growth factors, and proteases. These secreted proteins comprise the senescence-associated secretory phenotype (SASP). Senescent cells are thought to accumulate as an organism ages, and contribute to age-related diseases, including cancer, through promotion of inflammation and disruption of normal cellular function (1,2).
Because there is no single biomarker that can be used to definitively identify senescent cells, researchers must rely on a collection of biomarkers commonly associated with senescence (3). The Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit provides a collection of antibodies to commonly used biomarkers of senescence-associated cell cycle arrest (p16 INK4A, p21 Waf1/Cip1), senescence-associated DNA damage (gamma-Histone H2A.X), and the SASP (HMGB1, IL-6, TNF-α, MMP2). The kit also includes an antibody to lamin B1, which is frequently reduced in senescent cells.

  1. Tchkonia, T. et al. (2013) J Clin Invest 123, 966-72.
  2. Sun, Y. et al. (2018) Trends Mol Med 24, 871-885.
  3. Gorgoulis, V. et al. (2019) Cell 179, 813-827.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #78551

    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit

    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image

    使用 MMP-2 (D2O4T) Rabbit mAb #87809 对来自 3T3-L1 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb#8457（下图），对未经处理 (-) 或经过 LPS（100 ng/mL，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/mL，持续刺激 3 小时）处理的 Raw 264.7 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理 (-) 或经过 LPS（100 ng/ml，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/ml，刺激 3 小时；+）处理的 Raw 264.7 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系和大鼠脾脏组织的提取物进行蛋白质印迹分析。U-87 MG 细胞中 Lamin B1 蛋白的相对低表达与预测的表达模式一致。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    对小鼠 A20 细胞提取物的 p16 INK4A 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% input、泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 以及泳道 3 是 p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb。使用 p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb（上图）、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278（中图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对转染空载 (-) 或转染带有全长小鼠 p16 INK4A 蛋白 (mINK4A-Myc/DDK; +) 或全长小鼠 p15 INK4B 蛋白 (mINK4B-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未经处理 (-) 或经过 Doxorubicin #5927（250 nM，经过 7 天没有 doxorubicin 后再处理 24 小时；+）处理的 MEF 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 p16 INK4A (E5F3Y) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同小鼠细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。p16 INK4A 蛋白在 NIH/3T3 细胞中的阴性表达与预测的表达模式一致。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (E2R7A) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对对照型 C2C12 细胞（泳道 1）或 p21 Waf1/Cip1 敲除型 C2C12 细胞（泳道 2）提取物进行蛋白质印迹分析。p21 Waf1/Cip1 敲除型 C2C12 细胞中没有信号，这证实了抗体对 p21 Waf1/Cip1 的特异性。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb，对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 MMP-2 (D4O4T) Rabbit mAb，对 U87、3T3-L1 和 C2C12 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb（上）或 Histone H2A.X Antibody #2595（下）对未经处理的或经紫外线处理的 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    在 Leica BOND Rx 上使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢透明细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb 对 1 ng 重组小鼠  TNF-α #5178 进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb 对重组 Mouse His6Interleukin-6 (mHis6IL-6) 进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人正常乳腺进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (E2R7A) Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未经处理或经过 Nutlin 3a （10 μM，24 小时；+）处理的 C2C12、NIH/3T3（小鼠）、C2C12（小鼠）和 MCF7（人）细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb，对石蜡包埋的小鼠肺进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb 对未经处理 (-) 或经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011（50 ng/ml，4 小时；+）处理后再用 Nigericin（15 μM，45 分钟；+）处理的小鼠骨髓源性巨噬细胞 (mBMDM) 的培养基提取物进行蛋白印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    对 U87 细胞提取物的 MMP-2 蛋白质进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% input，泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，而泳道 3 是 MMP-2 (D2O4T) Rabbit mAb。使用 MMP-2 (D2O4T) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    在 Leica BOND Rx 上使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb（泳道 3），对经过 LPS（100 ng/mL，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/mL，持续刺激 3 小时）处理的 Raw 264.7 细胞提取物进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) #3678 与 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076ntibody #作为二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb（泳道 3），对经过 LPS（100 ng/ml，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/ml，刺激 3 小时）处理的 Raw 264.7 细胞提取物中的 IL-6 进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 BeWo 细胞沉淀物（左图，高表达）或 U-87 MG 细胞沉淀物（右图，低表达）进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    对经过 Nutlin-3a 处理（10 μM，24 小时）的 C2C12 细胞提取物 p21 Waf1/Cip1 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% input，泳道 2 是 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 是 p21 Waf1/Cip1 (E2R7A) Rabbit mAb。使用 p21 Waf1/Cip1 (E2R7A) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析，表明其定位于胞核内。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb（绿色）对经过 LPS（100 ng/ml，6 小时；左图）处理或未经处理（右图）的 Raw 264.7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左图）或经过 LPS（100 ng/ml，6 小时；右图）处理的 Raw 264.7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人食管腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 TNF-α (D2D4) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色）或经过 LPS（100 ng/ml，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/ml，持续处理 3 小时）处理（绿色）的 Raw 264.7 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb 对经过 LPS（100 ng/ml，6 小时）和 Brefeldin A #9972（300 ng/ml，LPS 处理持续 3 小时）处理（绿色）或者经过 Brefeldin A（300 ng/ml，3 小时）单独处理（蓝色）的 Raw 264.7 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414 作为二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人鳞状细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人体前列腺癌进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对未经处理的（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肾细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肝细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 41 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对未经处理的（左）或经紫外线处理（右）的石蜡包埋的 HT-29 细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 42 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb（绿色）对未经处理的（左）或经紫外线处理（右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 43 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人成熟卵巢畸胎瘤进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 44 Expand Image
    使用 Phospho-H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® isotype control #3900（虚线）对未经处理（蓝色）或已经过紫外线（100 mJ，恢复 2 小时；绿色）处理的 HeLa 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 45 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的人卵巢透明细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 46 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人胰腺细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 47 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人前列腺细胞进行免疫组织化学分析。
    Mouse Reactive Senescence Marker Antibody Sampler Kit: Image 48 Expand Image
    使用 Lamin B1 (E6M5T) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人胸腺组织进行免疫组织化学分析。
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