Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P08581

Entrez-Gene Id:

4233

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb 3077 100 µl H M R 145 Rabbit 
Met (D1C2) XP® Rabbit mAb 8198 100 µl H 140, 170 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Met, a high affinity tyrosine kinase receptor for hepatocyte growth factor (HGF, also known as scatter factor) is a disulfide-linked heterodimer made of 45 kDa α- and 145 kDa β-subunits (1,2). The α-subunit and the amino-terminal region of the β-subunit form the extracellular domain. The remainder of the β-chain spans the plasma membrane and contains a cytoplasmic region with tyrosine kinase activity. Interaction of Met with HGF results in autophosphorylation at multiple tyrosines, which recruit several downstream signaling components, including Gab1, c-Cbl, and PI3 kinase (3). These fundamental events are important for all of the biological functions involving Met kinase activity. The addition of a phosphate at cytoplasmic Tyr1003 is essential for Met protein ubiquitination and degradation (4). Phosphorylation at Tyr1234/1235 in the Met kinase domain is critical for kinase activation. Phosphorylation at Tyr1349 in the Met cytoplasmic domain provides a direct binding site for Gab1 (5). Research studies have shown that altered Met levels and/or tyrosine kinase activities are found in several types of tumors, including renal, colon, and breast. Thus, investigators have concluded that Met is an attractive potential cancer therapeutic and diagnostic target (6,7).

  1. Cooper, C.S. et al. (1984) Nature 311, 29-33.
  2. Bottaro, D.P. et al. (1991) Science 251, 802-4.
  3. Bardelli, A. et al. (1997) Oncogene 15, 3103-11.
  4. Taher, T.E. et al. (2002) J Immunol 169, 3793-800.
  5. Schaeper, U. et al. (2000) J Cell Biol 149, 1419-32.
  6. Eder, J.P. et al. (2009) Clin Cancer Res 15, 2207-14.
  7. Sattler, M. and Salgia, R. (2009) Update Cancer Ther 3, 109-118.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

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    Revision 1
    #8218

    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from HT-29 untreated cells using Met (D1C2) XP® Rabbit mAb #8198 lane view (left) shows a single target band (as indicated) at 1:50 and 1:250 dilutions of primary antibody. 对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb(上)和 Met (25H2) Mouse mAb #3127(下),对未处理或用 HGF 刺激的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb(上)或 β-Actin Antibody #4967(下),对来自 HT-29 细胞 (Met+)、SK-BR-3 细胞 (Met-) 和 T-47D 细胞 (Met-) 的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Ron (Ser1394) Antibody (A)、Phospho-Ron (Tyr1238/1239) Antibody (B)、Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb (C) 和 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 (D),对纯化的活性 Ron 激酶进行蛋白质印迹分析。通过蛋白质印迹分析表明,Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb 不与磷酰-Ron 发生交叉反应。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb #8198 对对照 HeLa 细胞(泳道 1) 或 Met 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。Met 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 Met 的特异性。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb,对未处理(左)或 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    在 Leica® Bond Rx 上使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的 3T3-Met 细胞(左)和 3T3-Ron 细胞(右)的异种移植物进行免疫组织化学分析,通过免疫组织化学分析显示这种抗体不与激活 Ron 的发生交叉反应。Pfizer, Inc. 惠赠图像。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    在 Leica® Bond Rx 上使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非小细胞肺癌组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Src Family (Tyr416) Antibody(左)或 hospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb(右),在 Src 转染的 NIH/3T3 细胞上进行免疫组织化学分析,通过免疫组织化学表明,该抗体不与 Tyr416 处磷酸化的 Src 发生交叉反应。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人转移性肺癌进行免疫组织化学分析。
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    使用 Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的 HCC827 异种移植物进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人肝细胞癌进行免疫组织化学分析。
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    在 SignalSlide Phospho-Met (1234/1235) IHC Controls #8118 [未经处理(左图)或经过 SU11274 处理(右图)的 MKN45 细胞] 上,使用 Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的人乳头状肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-Met (Tyr1234/1225) (D26) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的乳头状肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 17 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb,对石蜡包埋的细胞沉淀物 MKN-45(左)和 T-47D(右)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-MET (Tyr1234/Tyr1235) (D26) XP® Rabbit mAb,对未处理(左)或用 SU11274 处理(1 μM,3 小时;右)的 MKN45 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 19 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP® Rabbit mAb(绿色),对 HT-29 细胞和 T-47D 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 20 Expand Image
    对未处理(绿色)或用 SU11274 处理(蓝色)的 MKN-45 细胞进行流式细胞分析。
    PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet: Image 21 Expand Image
    使用 Met (D1C2) XP®3900 Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #(虚线)对固定和透化的 Ramos 细胞(蓝色,阴性)和 MKN-45 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。