Revision 1

#40415Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 38066 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
MAVS (D5A9E) Rabbit mAb 24930 20 µl 75, 52 kDa Rabbit IgG
TRAF2 (C192) Antibody 4724 20 µl 53 kDa Rabbit 
TRAF3 (E8H3B) Rabbit mAb 33640 20 µl 62 kDa Rabbit IgG
TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb 67591 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb 5483 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 11904 20 µl 50-55 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRF-3 (Ser386) (E7J8G) XP® Rabbit mAb 37829 20 µl 50-55 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb 29047 20 µl 45-55 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of signaling pathways in which MAVS plays a critical role. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Recognition of conserved molecular structures of viruses by host pattern-recognition receptors (PRRs) initiates innate antiviral immune responses. Several families of PRRs have been demonstrated to sense different microbial components (1,2). The RIG-I-like receptor (RLR) family, including RIG-I, MDA5, and LGP2, are the primary PRRs to recognize viral RNAs (3,4). Upon binding to viral RNA, these receptors undergo conformation change, leading to their interaction with mitochondrial antiviral signaling protein (MAVS). MAVS subsequently forms large prion-like polymers and serves as a platform to recruit multiple components, including TRAF proteins and TBK1, to form the so-called MAVS signalosome. MAVS signalosome, in turn, activates the IRF-3 and NF-kB pathways, leading to the production of type I IFNs and pro-inflammatory cytokines (5-9).

  1. Akira, S. et al. (2006) Cell 124, 783-801.
  2. Kumar, H. et al. (2011) Int Rev Immunol 30, 16-34.
  3. Nakhaei, P. et al. (2009) Semin Immunol 21, 215-22.
  4. Yoneyama, M. et al. (2015) Curr Opin Immunol 32, 48-53.
  5. Seth, R.B. et al. (2005) Cell 122, 669-82.
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  8. Dutta, S. et al. (2020) Front Microbiol 11, 1990.
  9. Thoresen, D. et al. (2021) Immunol Rev 304, 154-168.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #40415

    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit

    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP ® Rabbit mAb #11904 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser386) (E7J8G) XP® Rabbit mAb #37829（上图）、IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb #11904（中图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对未经处理或已经过 h-IFNa（10 ng/mL，16 小时）随后再经过 poly(I:C)（2.5 mg/mL，7 小时）和 MG-132（#2194，10mM，7 小时）处理的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 TRAF2 (C192) Antibody #4724 对 293T 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb, #11904（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb, #4970（下图）对对照型 HeLa 细胞（泳道 1） 或 IRF-3 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。IRF-3 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了该抗体对 IRF-3 的特异性。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 MAVS (D5A9E) Rabbit mAb，对转染空载 (-) 或转染表达全长人 MAVS (hMAVS; +) 的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 、IRF-3 (D83B9) Rabbit mAb #4302 (中图) 、以及β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ，对未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的野生型 (WT) 小鼠脂肪细胞，以及未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6 hr; +) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 TRAF3 (E8H3B) Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。RPMI 8226 细胞在 TRAF3 基因中含有杂合突变，从而导致表达缺失。RPMI 8226 细胞中没有信号，这证实了抗体的特异性。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    对 TF-1 细胞提取物 TRAF3 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 TRAF3 (E8H3B) Rabbit mAb。使用 TRAF3 (E8H3B) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser386) (E7J8G) XP® 兔单克隆抗体（上图）或 IRF-3 (D6I4C) XP® 兔单克隆抗体 #11904（下图）对未经 (-) 或经 Poly (I:C) (+) 处理的 A549 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对野生型 (+/+) 或 TBK1/NAK 敲除型 (-/-) HCT 116 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 TRAF2 (C192) Antibody，对Jurkat、293、HeLa、C2C12 和 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS (1 μg/ml) 处理长达 24 小时的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb（上图）和 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。NCI-H23 细胞中信号的缺失由 RNAseq 预测，并证实了抗体的特异性。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对 K-562 细胞提取物 TRAF6 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb。使用 TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    对 A20 细胞提取物 TRAF6 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb。使用 TRAF6 (E2K9D) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹法分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 MAVS (D5A9E) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb #11904 (下图) ，未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser386) (E7J8G) XP® 兔单克隆抗体（绿色）和 β-肌动蛋白 (13E5) 兔单克隆抗体 (Alexa Fluor® 647 偶联物) #8584（红色）对未转染（左图）或转染 Poly (I:C) (2.5 μg/ml，6 小时；右图）的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色= Hoechst 33342 #4082（DNA 荧光染料）。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS（1 μg/ml，1 小时）处理、未经处理或已经磷酸酶处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（泳道 3），对 THP-1 细胞提取物的 IRF-3进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 作为二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    对 MCF7 细胞提取物 MAVS 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 MAVS (D5A9E) Rabbit mAb。使用 MAVS (D5A9E) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (绿色) 及 EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #5488 (红色) ，对未经转染 (左图) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; 右图) 转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser 386) (E7J8G) XP® 兔单克隆抗体（实线）或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900（虚线）对用 TPA #4174（80 nM，24 小时）分化，随后不转染（蓝色）或转染 poly (dA:dT)（5 μg/mL，3 小时；绿色）的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    对 Raji 细胞提取物 TBK1/NAK 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb。使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb 对 WT（左图）或 TBK1 KO（右图）的 U20S 提取物进行蛋白质印迹法分析。用 Ponceau S 染色的膜进行总蛋白标准化（下图）。这些数据由 YCharOS Inc. 提供，该公司是一家开放科学公司，作为 CST 科学家生成的验证数据的合作伙伴，其使命是表征市售抗体。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（绿色）对用 TPA #4174（80nM，过夜）（左图）处理后用 LPS（1μg/ml，1 小时）（中图）处理或用 LPS 和 λ 磷酸酶处理（右图）的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 Phalloidin（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经（左）或经 Poly (I:C)（2.5 μg/ml，6 小时；右）转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    对 MCF7 细胞进行的共聚焦免疫荧光分析表明，MAVS (D5A9E) Rabbit mAb（左图，绿色）与线粒体染料 MitoTracker® Red CMXRos #9082（中间，红色）共定位。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb，对未经转染 (A) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; B) 转染的野生型小鼠脂肪细胞，及未经转染 (C) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; D) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb（绿色）对野生型（左图，阳性）或 TBK1/NAK 敲除型（右图，阴性）HCT 116 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已带有 Alexa Fluor® 555 Phalloidin #8953（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对用 TPA（80 nM，4 天）#9905 分化、未经处理（蓝色）或已经过 LPS（1 ug/ml，1 小时；绿色）#14011 处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）相比，使用 MAVS (D5A9E) Rabbit mAb（实线）对THP-1 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) 兔单克隆抗体对未转染（蓝色）或转染 Poly (I:C)（2.5 μg/ml，6 小时；绿色）的 HT-29 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    MAVS Signalosome Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (E8I3G) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 TALL-1 细胞（蓝色，阴性）和 Raji 细胞（绿色，阳性）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
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