Revision 4

#8334Store at -20C

1 个试剂盒

(5 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-HSL (Ser563) Antibody 4139 20 µl 81, 83 kDa Rabbit 
Phospho-HSL (Ser565) Antibody 4137 20 µl 81, 83 kDa Rabbit 
Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb 9349 20 µl 62 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb 18381 20 µl 81, 83 kDa Rabbit IgG
Phospho-HSL (Ser660) Antibody 45804 20 µl 81, 83 kDa Rabbit 

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Description

The Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation status of multiple members of the lipolysis pathway, including phosphorylated HSL and perilipin. The kit includes enough antibody to perform two western mini-blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Triacylglycerol is stored in lipid droplets as a primary energy reserve. During lipolysis, triacylglycerols in adipocytes are hydrolyzed into free fatty acids and glycerol. Perilipin, localized at the periphery of lipid droplets, serves as a protective coating against lipases (1-3). Evidence suggests that PKA regulates lipolysis by phosphorylating perilipin and hormone-sensitive lipase (HSL) (1,2,4,5). Phosphorylation of perilipin results in the conformational change that exposes lipid droplets to endogenous lipases, such as HSL (2). Phosphorylation of HSL at Ser563, Ser659, and Ser660 by PKA stimulates HSL activity, which in turn catalyzes the hydrolysis of triacylglycerol (6,7).

  1. Greenberg, A.S. et al. (1991) J Biol Chem 266, 11341-6.
  2. Brasaemle, D.L. (2007) J Lipid Res 48, 2547-59.
  3. Ducharme, N.A. and Bickel, P.E. (2008) Endocrinology 149, 942-9.
  4. Egan, J.J. et al. (1990) J Biol Chem 265, 18769-75.
  5. Brasaemle, D.L. et al. (2009) Mol Cell Biochem 326, 15-21.
  6. Degerman, E. et al. (1990) Proc Natl Acad Sci U S A 87, 533-7.
  7. Anthonsen, M.W. et al. (1998) J Biol Chem 273, 215-21.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 4
    #8334

    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit

    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of 10-day differentiated 3T3-L1 cells (left, positive) or undifferentiated 3T3-L1 cells (right, negative) using HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb (green), Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #52975 (red), and DAPI #4083 (blue).
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    对分化 4 天的 3T3-L1 细胞提取物的 perilipin-1 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb。Mouse Anti-rabbit IgG (Light-Chain Specific) (L57A3) mAb #3677 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 可用作二抗。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对未分化或分化的 3T3-L1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-HSL (Ser565) Antibody 对经 forskolin、oligomycin 或 lambda protein phosphatase 处理的不同 3T3-L1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-HSL (Ser563) Antibody 对经异丙肾上腺素或 lambda protein phosphatase 处理的不同 3T3-L1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-HSL (Ser660) Antibody(上图)或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对未分化的(泳道 1)或分化 4 天后进入脂肪细胞并经过异丙肾上腺素(10 μM,20 分钟;泳道 2)处理的 3T3-L1 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 人周脂素-1 (D1D8) XP® 兔单克隆抗体(上图)和 β-肌动蛋白抗体 #4967(下图)对人前脂肪细胞和脂肪细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb(上)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对人体前脂肪细胞和分化的人体脂肪细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-HSL (Ser565) Antibody(红色)标记(显示不同细胞的细胞质定位)且未经(左)或经磷酸酶(右)处理的 3T3-L1 脂肪细胞,进行共聚焦免疫荧光分析。用 BODIPY® 493/503(绿色)标记脂肪滴。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-HSL (Ser660) Antibody对未分化的(泳道 1)或分化 4 天后进入脂肪细胞并经过异丙肾上腺素(10 μM,20 分钟;泳道 2)处理的 3T3-L1 细胞进行蛋白质印迹分析。在孵育膜之前,通过不使用肽(左图)、使用 HSL (Ser660) 非磷酸肽(中图)或使用 HSL (Ser660) 磷酸肽(右图)孵育抗体来验证抗体的磷酸特异性。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 人周脂素-1 (D1D8) XP® 兔单克隆抗体 对石蜡包埋的乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。标注脂肪细胞的特异性染色。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    对分化人脂肪细胞提取物 HSL 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10 % input,泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900,泳道 3 为 HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb。Western blot analysis was performed usingHSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb.
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    在添加对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)的情况下,使用 人周脂素-1 (D1D8) XP® 兔单克隆抗体 对石蜡包埋的小鼠褐色脂肪细胞进行免疫组织化学分析。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb(绿色),对分化的人体脂肪细胞(左)或人体前脂肪细胞(右)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DyLight® 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肾脏进行免疫组织化学分析,并对相邻的脂肪组织进行染色。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠前列腺进行免疫组织化学分析,并对相邻的脂肪组织进行染色。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Perilipin-1 (D1D8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠睾丸进行免疫组织化学分析,并对相邻的脂肪组织进行染色。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 人周脂素-1 (D1D8) XP® 兔单克隆抗体(绿色)对冷冻的小鼠褐色脂肪组织进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Lipolysis Activation Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Perilipin (D1D8) Rabbit mAb(绿色)对差异 8 天的 3T3-L1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。