Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IHC-P, IF-F, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H M R

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

14, 16

Source/Isotype:

Mouse IgG2b kappa

UniProt ID:

#Q9GZQ8

Entrez-Gene Id:

81631

Product Information

Product Usage Information

This product is the carrier free version of product #83506. All data were generated using the same antibody clone in the standard formulation which contains BSA and glycerol.

This formulation is ideal for use with technologies requiring specialized or custom antibody labeling, including fluorophores, metals, lanthanides, and oligonucleotides. It is not recommended for ChIP, ChIP-seq, CUT&RUN or CUT&Tag assays. If you require a carrier free formulation for chromatin profiling, please contact us. Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Formulation

Supplied in 1X PBS, BSA and Azide Free.

For standard formulation of this product see product #83506

Storage

Store at -20°C. This product will freeze at -20°C so it is recommended to aliquot into single-use vials to avoid multiple freeze/thaw cycles. A slight precipitate may be present and can be dissolved by gently vortexing. This will not interfere with antibody performance.

Specificity / Sensitivity

LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) recognizes endogenous levels of total LC3B protein. This antibody detects both type I and type II forms of LC3B. Cross reactivity was not detected with other family members.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the amino terminus of human LC3B protein.

Background

Autophagy is a catabolic process for the autophagosomic-lysosomal degradation of bulk cytoplasmic contents (1,2). Autophagy is generally activated by conditions of nutrient deprivation, but it has also been associated with a number of physiological processes including development, differentiation, neurodegenerative diseases, infection, and cancer (3). Autophagy marker Light Chain 3 (LC3) was originally identified as a subunit of microtubule-associated proteins 1A and 1B (termed MAP1LC3) (4) and subsequently found to contain similarity to the yeast protein Apg8/Aut7/Cvt5 critical for autophagy (5). Three human LC3 isoforms (LC3A, LC3B, and LC3C) undergo posttranslational modifications during autophagy (6-9). Cleavage of LC3 at the carboxy terminus immediately following synthesis yields the cytosolic LC3-I form. During autophagy, LC3-I is converted to LC3-II through lipidation by a ubiquitin-like system involving Atg7 and Atg3 that allows for LC3 to become associated with autophagic vesicles (6-10). The presence of LC3 in autophagosomes and the conversion of LC3 to the lower migrating form, LC3-II, have been used as indicators of autophagy (11).

  1. Reggiori, F. and Klionsky, D.J. (2002) Eukaryot. Cell 1, 11-21.
  2. Codogno, P. and Meijer, A.J. (2005) Cell Death Differ. 12 Suppl 2, 1509-18.
  3. Levine, B. and Yuan, J. (2005) J. Clin. Invest. 115, 2679-88.
  4. Mann, S.S. and Hammarback, J.A. (1994) J. Biol. Chem. 269, 11492-97.
  5. Lang, T. et al. (1998) EMBO J. 17, 3597-607.
  6. Kabeya, Y. et al. (2000) EMBO J. 19, 5720-28.
  7. He, H. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278, 29278-87.
  8. Tanida, I. et al. (2004) J. Biol. Chem. 279, 47704-10.
  9. Wu, J. et al. (2006) Biochem. Biophys. Res. Commun. 339, 437-42.
  10. Ichimura, Y. et al. (2000) Nature 408, 488-92.
  11. Kabeya, Y. et al. (2004) J. Cell Sci. 117, 2805-12.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Applications Key

WB: Western Blotting IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) IF-F: Immunofluorescence (Frozen) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

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Revision 1
#20371

LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free)

Western Blotting Image 1: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb #83506(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或经过 Chloroquine #14774(50 μM,18 小时)处理的 HCT 116 和 HCT 116 LC3B 敲除型细胞进行蛋白质印迹分析。HCT 116 敲除型细胞中没有信号,这证实了抗体对 LC3B 的特异性。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Western Blotting Image 2: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未经 (-) 或已经氯喹 #14774(50 μM,过夜;+)处理的 HeLa、C2C12 和 KNRK 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Western Blotting Image 3: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对 HeLa 细胞或已敲除 LC3B 的 HeLa 细胞 (HeLa/LC3B KO) 的提取物进行蛋白印迹分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Western Blotting Image 4: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体(下图)对未处理的 (-) 或用 Earle's 平衡盐溶液 (EBSS)(规定时间)饥饿的 A549 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Western Blotting Image 5: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体(上图)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未处理的 (-) 或已经 Torin 1 #14379(250 nM,5 小时;+)处理的 MCF7 和 Raji 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 1: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 2: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人食管癌细胞进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 3: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 4: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) 小鼠单克隆抗体对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 5: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对未经处理(左上图)或经过 Chloroquine #14774 处理(右上图)的石蜡包埋的 HCT116 细胞沉淀物和未经处理(左下图)或经过 Chloroquine #14774 处理(右下图)的 HCT116 LC3B 敲除型细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 6: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的正常人脑细胞进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 7: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的 KARPAS 299 细胞沉淀物(左图,高表达)或 VCaP 细胞沉淀物(右图,低表达)进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 8: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的未处理的(左图)或经过 Chloroquine #14774 处理的(右图)HeLa 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunohistochemistry Image 9: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 对石蜡包埋的人正常脾进行免疫组织化学分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunofluorescence Image 1: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
对使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb #83506(左图,绿色)标记以及使用 GFAP (E4L7M) XP® Rabbit mAb #80788(右图,红色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)共同标记的固定冷冻的小鼠小脑组织进行共聚焦免疫荧光分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunofluorescence Image 2: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
对使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb #83506(左图,绿色)标记以及使用 GFAP (E4L7M) XP® Rabbit mAb #80788(右图,红色)和 DAPI #4083(右图,蓝色)共同标记的固定冷冻的小鼠脑桥组织进行共聚焦免疫荧光分析。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Immunofluorescence Image 1: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb(绿色)对未经处理(左图)或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(中图)处理的 HCT 116 细胞或经过 Chloroquine #14774(50 µM,过夜)(右图)处理的 LC3B HCT 116 敲除型细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 β-Actin (13E5) Rabbit mAb #4970(红色)标记,胞核用 DAPI #4083(蓝色)标记。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Flow Cytometry Image 1: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb Antibody(实线)或浓度匹配的 Mouse (E7Q5L) mAb IgG2b Isotype Control #53484(虚线)对未经处理(蓝色)或已经过 Chloroquine #14774(50 μM,18 小时;绿色)处理的 HCT-116 细胞进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L),F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。
Flow Cytometry Image 2: LC3B (E5Q2K) Mouse mAb (BSA and Azide Free) Expand Image
使用 LC3B (E5Q2K) Mouse mAb 或浓度匹配的 Mouse (E7Q5L) mAb IgG2b Isotype Control #53484(虚线)对野生型 HCT-116 细胞(绿色,高表达)或敲除型 LC3B(蓝色,阴性)进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L),F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。数据的生成使用的是该产品的常规组分产品。