Revision 3

#9092Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Oct-4A (C30A3) Rabbit mAb 2840 20 µl 45 kDa Rabbit IgG
Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb 3579 20 µl 35 kDa Rabbit 
Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb 4903 20 µl 42 kDa Rabbit IgG
LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 3695 20 µl 26 kDa Rabbit IgG
KLF4 Antibody 4038 20 µl 65 kDa Rabbit 
c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 5605 20 µl 57-65 kDa Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The StemLight® iPS cell Reprogramming Antibody Kit contains a panel of antibodies for the detection of various proteins, combinations of which have been used to reprogram somatic cells to Induced Pluripotent Stem (iPS) cells. The kit can be used to track efficiency of expression of the reprogramming factors following transfection, viral transduction and other means of protein delivery. The kit components are pre-optimized for parallel use in immunofluorescent analysis at a standard dilution, but components are also validated for use in other applications --please refer to individual datasheet information for application specific recommendations. Enough reagents are provided for 160 immunofluorescent assays based on a working volume of 100 μl.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Pluripotency is the ability of a cell to differentiate into cell types of the three germ layers, the endoderm, ectoderm and mesoderm. It is a property shared by embryonic stem cells, embryonic carcinoma and induced pluripotent cells.
Oct-4, Sox2 and Nanog are key transcriptional regulators that are highly expressed in pluripotent cells (1). Together they form a transcriptional network that maintains cells in a pluripotent state (2,3). Over-expression of Oct-4 and Sox2 along with Klf4 and c- Myc can induce pluripotency in both mouse and human somatic cells, highlighting their roles as key regulators of the transcrip- tional network necessary for renewal and pluripotency (4-5). It has also been demonstrated that overexpression of Oct-4, Sox2, Nanog and Lin28 can induce pluripotency in human somatic cells (6). Upon differentiation of pluripotent cultures, expression of Oct-4, Nanog and Sox2 is downregulated.
SSEA4, TRA-1-81 and TRA-1-60 antibodies recognize antigens expressed on the cell surface of all pluripotent cells. SSEA4 recognizes a glycolipid carbohydrate epitope (7). TRA-1-60(S) and TRA-1-81 antibodies recognize different proteoglycan epitopes on variants of the same protein, podocalyxin (8). These epitopes are neuraminadase sensitive and resistant, respectively. Reactivity of SSEA4, TRA-1-81 and TRA-1-60 antibodies with their respective cell surface markers are lost upon differentiation of pluripotent cells, corresponding with a loss of pluripotent potential (9).

  1. Looijenga, L.H. et al. (2003) Cancer Res 63, 2244-50.
  2. Pesce, M. and Schöler, H.R. (2001) Stem Cells 19, 271-8.
  3. Pan, G. and Thomson, J.A. (2007) Cell Res 17, 42-9.
  4. Takahashi, K. and Yamanaka, S. (2006) Cell 126, 663-76.
  5. Okita, K. et al. (2007) Nature 448, 313-7.
  6. Yu, J. et al. (2007) Science 318, 1917-20.
  7. Henderson, J.K. et al. (2002) Stem Cells 20, 329-37.
  8. Draper, J.S. et al. (2002) J Anat 200, 249-58.
  9. Schopperle, W.M. and DeWolf, W.C. (2007) Stem Cells 25, 723-30.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    StemLight® is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Revision 3
    #9092

    StemLight iPS Cell Reprogramming Antibody Kit

    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 1 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb #5605 对 Raji 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Oct-4A (C30A3) Rabbit mAb 对 NTERA2 和小鼠胚胎干细胞 (mESC) 提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb 对 NTERA2 和 NCCIT 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 4 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 对 NTERA-2 和 IGROV1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 5 Expand Image
    使用 KLF4 Antibody 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb 对 NCCIT、NTERA-2 和 iPS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 7 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb Antibody, #5605 (上图)或β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照 HEK293 细胞(泳道 1)或 c-Myc 敲除型 HEK293 细胞(泳道2)提取物进行蛋白质印迹法分析。c-Myc 敲除型 HEK293 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Myc 的特异性。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Oct-4A (C30A3) Rabbit mAb(绿色)对 NTERA2 细胞(左图)和在小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 饲养层生长的小鼠胚胎干细胞 (mES)(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人精原细胞瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 10 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对转染空载或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Oct-4A (C30A3) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 Daudi 细胞(蓝色,阴性)和 NCCIT 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 12 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 对以下石蜡包埋的人肿瘤组织进行免疫组织化学分析:精原细胞癌细胞(左上图)、前列腺癌细胞(右上图)、肺神经内分泌癌细胞(左下图)和乳腺导管癌细胞(右下图)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb(绿色)对 NTERA-2 细胞(左图)和 Hela 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 14 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb(绿色)对 NTERA2 细胞(左图)和 Hela 细胞(右图)进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 16 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 IGROV-1 细胞沉淀物(左图,阳性)或 HCT 116 细胞沉淀物(右图,阴性)进行免疫组织化学分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb 对 Hela 细胞(蓝色)和 NTERA-2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 18 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb(绿色)对转染空载(左图)或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染(右图)的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 DY-554 Phalloidin(红色)标记。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb 对 Hela 细胞(蓝色)和 NTERA2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 20 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 对以下石蜡包埋的正常人组织进行免疫组织化学分析:睾丸(左上图)、前列腺(右上图)、胰腺(左下图)和肾脏(右下图)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 21 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb(绿色)对 NTERA-2 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    StemLight™ iPS Cell Reprogramming Antibody Kit: Image 22 Expand Image
    使用 LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb 对 Hela 细胞(蓝色)和 NTERA2 细胞(绿色)进行流式细胞分析。