Revision 3

#52239Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb 19781 20 µl 40 kDa Rabbit IgG
STING (D2P2F) Rabbit mAb 13647 20 µl 33, 35 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb 29047 20 µl 45-55 kDa Rabbit IgG
IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 11904 20 µl 50-55 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRAK4 (Thr345/Ser346) (D6D7) Rabbit mAb 11927 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
IRAK4 Antibody 4363 20 µl 55 kDa Rabbit 
Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb 12390 20 µl 65 kDa Rabbit IgG
IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb 13014 20 µl 65 kDa Rabbit IgG
Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb 83186 20 µl 17 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of multiple signaling pathways involved in innate immunity using phospho-specific, cleavage-specific, and control antibodies. The kit contains enough primary antibodies to perform at least two western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

The innate immune system responds rapidly to pathogens by detecting conserved pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and damage/danger-associated molecular patterns (DAMPs) through pattern recognition receptors (PRRs). There are several families of PRRs. Toll-like receptors (TLRs) are transmembrane PRRs and signal through recruitment of adaptor proteins, including MyD88, which leads to recruitment and phosphorylation of IRAK1 and IRAK4, followed by activation of NF-κB and MAP kinases (1-3). Some TLRs also activate IRFs, which upregulate the type I interferon response. Activation of TLR3 and TLR4 results in phosphorylation and activation of IRF-3, while TLR7, TLR8, and TLR9 lead to activation of IRF-7 (2, 3). STING is a multi-pass ER transmembrane protein that is activated in response to intracellular DNA downstream of DNA-sensing cytoplasmic PRRs, such as DDX41, or by binding the second messenger cyclic-GMP-AMP (cGAMP) produced by cGAS (4-6). Following activation, STING translocates with TBK1 to perinuclear endosomes, leading to phosphorylation and activation of IRF-3 and NF-κB (7, 8). Following activation and translocation, STING gets phosphorylated by ULK1, resulting in STING inactivation and degradation (9). Inflammasomes are cytoplasmic multimeric protein complexes that assemble in response to PAMPs or DAMPs detected by AIM2 or members of the nod-like receptor (NLR) family, such as NLRP3 (10). Inflammasomes activate Caspase-1, which cleaves the IL-1β and IL-18 precursor proteins into the mature forms (10).

  1. Janssens, S. and Beyaert, R. (2003) Mol Cell 11, 293-302.
  2. Barton, G.M. and Kagan, J.C. (2009) Nat Rev Immunol 9, 535-42.
  3. Blasius, A.L. and Beutler, B. (2010) Immunity 32, 305-15.
  4. Ishikawa, H. and Barber, G.N. (2008) Nature 455, 674-8.
  5. Zhang, Z. et al. (2011) Nat Immunol 12, 959-65.
  6. Sun, L. et al. (2013) Science 339, 786-91.
  7. Zhong, B. et al. (2008) Immunity 29, 538-50.
  8. Ishikawa, H. et al. (2009) Nature 461, 788-92.
  9. Konno, H. et al. (2013) Cell 155, 688-98.
  10. Rathinam, V.A. and Fitzgerald, K.A. (2016) Cell 165, 792-800.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    Revision 3
    #52239

    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit

    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP ® Rabbit mAb #11904 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 IRAK4 Antibody #4363 对 THP-1 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb, #11904(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb, #4970(下图)对对照型 HeLa 细胞(泳道 1) 或 IRF-3 敲除型 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。IRF-3 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 IRF-3 的特异性。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-IRAK4 (Thr345/Ser346) (D6D7) Rabbit mAb (上图) 或 IRAK4 Antibody #4363 (下图),对未经处理的 (-) 或经 Human Interleukin-1β (hIL-1β) #8900(50ng/ml,15分钟;+) 处理的血清饥饿 KARPAS-299 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。细胞系资料来源:剑桥大学的 Abraham Karpas 博士。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-7 (Ser477) (D7E1W) Rabbit mAb (上图) 、IRF-7 Antibody #4920 (中图) 、或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ,未经处理或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml,过夜) 处理再经 poly (I:C) (2.5 μg/ml, 7小时) 按指定要求转染的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对未处理 (-) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 过夜; +)处理的 HT-29 和 G-361 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb(上图)、STING (D2P2F) Rabbit mAb #13647(中图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174(80 nM,16 小时)分化,随后不转染(-)或转染 poly(dA:dT)(5 ug/mL,3 小时;+)的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 、IRF-3 (D83B9) Rabbit mAb #4302 (中图) 、以及β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ,对未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的野生型 (WT) 小鼠脂肪细胞,以及未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6 hr; +) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 IRAK4 Antibody 对 THP-1(人)、RAW 264.7(小鼠)和 H-4-II-E(大鼠)细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) # 8900 进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-),SignalSilence® IRF-7 siRNA I #13139 (+) 或 SignalSilence® IRF-7 siRNA II #13291 (+) 转染的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。转染 24 小时后,使用 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (10 ng/ml, 过夜; +)对细胞进行处理,然后使用 IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb #13014(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下)对细胞进行蛋白质印迹分析。IRF-7 (D2A1J) Rabbit mAb 确认了 IRF-7 的表达沉默,而 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 则被用于上样对照。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对转染空载 (-) 或转染人 STING 蛋白 (hSTING; +) 或小鼠 STING 蛋白 (mSTING; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb #11904 (下图) ,未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb,对收集自 THP-1 细胞的细胞或培养基的提取物进行蛋白质印迹分析,并且这些 THP-1 细胞使用 TPA #4147(80 nM,过夜)进行分化,随后使用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理 (-) 或不用其进行处理 (+)。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(泳道 2)或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb(泳道 3),对 THP-1 细胞提取物的 IRF-3进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 作为二抗。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2) 或 STING (D2P2F) Rabbit mAb (泳道 3),对 HL-60 细胞提取物STING进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (绿色) 及 EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #5488 (红色) ,对未经转染 (左图) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; 右图) 转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经(左)或经 Poly (I:C)(2.5 μg/ml,6 小时;右)转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb,对未经转染 (A) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; B) 转染的野生型小鼠脂肪细胞,及未经转染 (C) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; D) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Cleaved-IL-1β (Asp116) (D3A3Z) Rabbit mAb(绿色),对使用 TPA #4174(80 nM, 24 小时)分化,并随后用 Lipopolysaccharides (LPS) #14011(1 μg/ml,6 小时)处理或不用其处理的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) 兔单克隆抗体对未转染(蓝色)或转染 Poly (I:C)(2.5 μg/ml,6 小时;绿色)的 HT-29 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    在 Leica® BOND Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人前列腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人扁桃体组织进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的叙利亚仓鼠子宫组织进行免疫组织化学分析。
    Innate Immunity Activation Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 HT-29(左图,阳性)和 A549(右图,阴性)细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。