Revision 3

#44902Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
IFNGR1 (E444) Antibody 10405 20 µl 45-90 kDa Rabbit 
Jak1 (6G4) Rabbit mAb 3344 20 µl 130 kDa Rabbit IgG
Phospho-Jak1(Tyr1034/1035) (D7N4Z) Rabbit mAb 74129 20 µl 130 kDa Rabbit IgG
Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb 3230 20 µl 125 kDa Rabbit IgG
Phospho-Jak2 (Tyr1007/1008) (C80C3) Rabbit mAb 3776 20 µl 125 kDa Rabbit IgG
Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 7649 20 µl 84, 91 kDa Rabbit IgG
Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 8826 20 µl 91 kDa Rabbit IgG
Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 14994 20 µl 84, 91 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of the IFN-γ signaling pathway using phospho-specific and control antibodies. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Originally discovered in the late 1950s for their antiviral activity, interferons (IFNs) have since been assigned diverse roles in many physiological and pathological processes. There are three families of IFNs: types I, II, and III. In humans, type I contains IFN-α (13 different subtypes), IFN-β (also known as IFN-β1), IFN-ε, IFN-κ, and IFN-ω. They bind to a receptor complex containing IFNAR1 and IFNAR2, which is broadly expressed on most cells. IFN-γ is the sole member of type II IFN. It signals through a receptor complex consisting of IFNγR1 and IFNγR2, which is also expressed on most cell types. Type III IFN, also known as interferon lambdas (IFN-λs), have four members in humans: IFN-λ1 (IL29), IFN-λ2 (IL28A), IFN-λ3 (IL28B), and IFN-λ4. IFN-λs signal through a heterodimeric receptor comprised of IFNλR1 and IL-10R2. While IL-10R2 is broadly expressed and shared by the IL-10 family cytokines, IFNλR1 expression is restricted to epithelial cells, neuronal cells, and subsets of myeloid cells (1-3). Engagement of all IFNs with their receptors initiates downstream signaling events, mainly, activation of the Jak–Stat signaling cascade. For type I and III IFNs, Jak1 and Tyk2 are phosphorylated and activated, leading to subsequent phosphorylation of Stat1 and Stat2. Phosphorylated Stat1 and Stat2 are released from the receptor complex and, together with IRF-9, they form so-called ISGF3 (interferon-stimulated gene factor 3) transcriptional complex. ISGF3 translocates to the nucleus, binds to the interferon-stimulated response element (ISRE) to initiate the transcription of a wide array of interferon-stimulated genes (ISGs) (4,5). On the other hand, IFN-γ induces phosphorylation and activation of Jak1 and Jak2, which subsequently phosphorylate Stat1. Phosphorylated Stat1 dimerizes, translocates to the nucleus, and binds to γ-interferon-activated site (GAS) to initiate the transcription of ISGs (6,7).

  1. Schneider, W.M. et al. (2014) Annu Rev Immunol 32, 513-45.
  2. Hemann, E.A. et al. (2017) Front Immunol 8, 1707.
  3. Walter, M.R. (2020) Front Immunol 11, 606489.
  4. Hervas-Stubbs, S. et al. (2011) Clin Cancer Res 17, 2619-27.
  5. Mesev, E.V. et al. (2019) Nat Microbiol 4, 914-924.
  6. Green, D.S. et al. (2017) J Biol Chem 292, 13925-13933.
  7. Ivashkiv, L.B. (2018) Nat Rev Immunol 18, 545-558.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    Jak antibodies produced under license (granting certain rights including those under U.S. Patent No. 5,658,791) from Chemicon International, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
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    限制使用

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 3
    #44902

    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit

    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经过 (hIFN-γ) #8901（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞和 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用 human AIM2 promoter primers、human FZD5 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb #14994 对 MCF-7 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HT-1080 细胞和 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了 Stat1 的已知靶标基因 FZD5 基因内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HT-1080 细胞和 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在染色体 2（上图）内的结合，包括 Stat1 的已知靶标基因 FZD5 基因（下图）（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 IFNGR1 (E444) Antibody（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb #14994（上图）和 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对 A549 细胞（泳道 1）或 STAT1 敲除型细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。STAT1 敲除型 A549 细胞中没有信号，这证实了抗体对 STAT1 的特异性。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb #3230（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Jak1 (6G4) Rabbit mAb 对 ACHN、SR、CTLL-2 和 PC12 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Jak2 (Tyr1007/1008) (C80C3) Rabbit mAb #3776（顶图）或总 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb #3230（底图）对未处理的或经 GM-CSF 或 IL-3（5 分钟）处理的 UT-7 和 BaF3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-Jak1 (Tyr1034/1035) (D7N4Z) Rabbit mAb (上图) 或 Jak1 (6G4) Rabbit mAb (下图) ，对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。这些细胞系经血清饥饿过夜 (-) 之后以 Human Interferon-α1 #8927 (hIFN-α1, 10 ng/ml, 15分钟; +) 或 Human Interleukin-4 #8919 (hIL-4, 10 ng/ml, 10分钟; +) 处理。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb（上图）或 Stat1 Antibody #9172（下图），对未经处理或已经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927（10 ng/ml，30 分钟）处理的 HeLa、A20 和 PC-12 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 对未经处理 (-) 或已经紫外线（恢复 2 小时；+）处理的不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 IFNGR1 (E444) Antibody（上图）、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278（中间）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对转染空载 (-) 或转染带 Myc/DDK 标签的人全长 IFNGR1 蛋白 (hIFNGR1-Myc/DDK; +) 表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb #3230 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 对经 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 Jak2 siRNA (+) 转染的 K-562 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb 可确认 Jak2 蛋白表达的沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 则被用于控制 Jak2 siRNA 的上样和特异性。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    在对照肽（左图）或 Jak1 Blocking Peptide（右图）存在的情况下，使用 Jak1 (6G4) Rabbit mAb #3344 对石蜡包埋的人体乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb（绿色）和 β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #2116（红色），对未经处理（左图）或已经 hIFN-α1 #8927（100 ng/mL，30 分钟；右图）处理的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb（上图）或 Stat1 (42H3) Rabbit mAb #9175（下图），对未经处理 (-) 或已经 CIP 和 λ 磷酸酶 (+) 处理且经紫外线处理的 Hela 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    对 NCI-H226 细胞提取物 IFNGR1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10 % input，泳道 2 为 Normal Rabbit IgG #2729，泳道 3 为 IFNGR1 (E444) Antibody。使用 IFNGR1 (E444) Antibody 进行蛋白印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 检测。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2) 或 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb (泳道 3)，对MCF7 细胞提取物的 Stat1 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Stat1 (9H2) Mouse mAb #9176 进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb 对 K-562、THP-1、TF-1 和 BaF3 细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Jak1 (6G4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 对未经处理（蓝色）或已经 hIFN-α1 #8927（绿色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb（上图）或 Stat1 (42H3) Rabbit mAb #9175（下图），对未经处理 (-) 或已经 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901（100 ng/ml，30 分钟；+）处理的 Hela 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 Jak1 (6G4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 IRF-1 内结合，IRF-1 是磷酸 Stat1 的一种已知靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    在对照肽（左图）或 Jak2 Blocking Peptide #1039（右图）存在的情况下，使用 Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mA 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 ，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 4 x 106 个 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 5 μl Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 5（上图）内的结合，包括 Phospho-Stat1 的已知靶标基因 IRF1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 对对照品（左图）或已经 λ 磷酸酶（右图）处理的石蜡包埋的人淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb (绿色) 与 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700 (红色)，对经过血清饥饿过夜（左图）处理，或经Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (1,000 单位/mL，30 分钟（右图) 处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢癌细胞进行免疫组织化学分析。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 38 Expand Image
    以 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb（实线）对 ACHN 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 39 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对已经 IFN-γ（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat1 (Ser727) (D3B7) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    IFN-γ Signaling Pathway Antibody Sampler Kit: Image 40 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 Human Interferon-γ (hIFN-γ) #8901（50 ng/ml，30 分钟）处理的 HT-1080 细胞的交联染色质，与 Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers #5148 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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