Revision 1

#38866Store at -20C

1 个试剂盒

(7 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
STING (D2P2F) Rabbit mAb 13647 20 µl 33, 35 kDa Rabbit IgG
Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb 50907 20 µl 40 kDa Rabbit IgG
cGAS (D1D3G) Rabbit mAb 15102 20 µl 62 kDa Rabbit IgG
TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb 3504 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb 5483 20 µl 84 kDa Rabbit IgG
IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 11904 20 µl 50-55 kDa Rabbit IgG
Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb 29047 20 µl 45-55 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

The Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting activation and expression of key components of the STING pathway using phospho-specific and control antibodies. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Stimulator of interferon genes (STING, TMEM173, MITA) is a transmembrane adaptor protein that is a critical component of the cellular innate immune response to pathogenic cytoplasmic DNA (1,2). STING is a ubiquitously expressed protein found predominantly in the ER (1). The enzyme cGAMP synthase (cGAS) produces the second messenger cyclic-GMP-AMP (cGAMP) in response to cytoplasmic DNA (3,4). cGAMP binds and activates STING (3,4). In addition, detection of cytoplasmic DNA by nucleic acid sensors, including DDX41 or IFI16, results in STING activation (5,6). Following activation, STING translocates with TBK1 to perinuclear endosomes and gets phosphorylated by ULK1 at Ser366 (Ser365 in mouse) (7,8). The TBK1 kinase phosphorylates and activates IRF-3 and NF-κB, which leads to the induction of type I interferon and other immune response genes (1,2,7).

  1. Ishikawa, H. and Barber, G.N. (2008) Nature 455, 674-8.
  2. Zhong, B. et al. (2008) Immunity 29, 538-50.
  3. Sun, L. et al. (2013) Science 339, 786-91.
  4. Wu, J. et al. (2013) Science 339, 826-30.
  5. Zhang, Z. et al. (2011) Nat Immunol 12, 959-65.
  6. Unterholzner, L. et al. (2010) Nat Immunol 11, 997-1004.
  7. Ishikawa, H. et al. (2009) Nature 461, 788-92.
  8. Konno, H. et al. (2013) Cell 155, 688-98.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #38866

    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit

    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP ® Rabbit mAb #11904 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (1 mg/ml) from cGAS (D1D3G) Rabbit mAb #15102. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa.
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb, #11904（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb, #4970（下图）对对照型 HeLa 细胞（泳道 1） 或 IRF-3 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。IRF-3 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了该抗体对 IRF-3 的特异性。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 cGAS (D1D3G) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 、IRF-3 (D83B9) Rabbit mAb #4302 (中图) 、以及β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下图) ，对未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的野生型 (WT) 小鼠脂肪细胞，以及未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6 hr; +) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 TBK/NAK (D1B4) 兔单克隆抗体 #3504（上图）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对未经处理 (-) 的或 TBK1/NAK 敲除型 (+) HCT116 细胞提取物进行蛋白印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb（上图）、STING (D2P2F) Rabbit mAb #13647（中间）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174（80 nM，16 小时）分化，随后不转染 (-) 或转染 poly(dA:dT)（5 ug/mL，3 小时；+）的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS (1 μg/ml) 处理长达 24 小时的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对转染空载 (-) 或转染人 STING 蛋白 (hSTING; +) 或小鼠 STING 蛋白 (mSTING; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 cGAS (D1D3G) Rabbit mAb 对转染空载 (-) 或转染带有 Myc 标签的全长人 cGAS 蛋白 (hcGAS-Myc；+) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (上图) 或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb #11904 (下图) ，未经转染 (-) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; +) 转染的 HT-29 细胞进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174（80 nM，16 小时）分化，随后转染 poly(dA:dT)（5 ug/mL，3 小时）的 THP-1 提取物磷酸化 STING (Ser366) 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb。使用 Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。依次使用 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 和 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 作为二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（上图）或总 TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb #3504（下图）对用 TPA #4174（80 nM，过夜）分化后用 LPS（1 μg/ml，1 小时）处理、未经处理或已经磷酸酶处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（泳道 3），对 THP-1 细胞提取物的 IRF-3进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 和 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 作为二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2) 或 STING (D2P2F) Rabbit mAb (泳道 3)，对 HL-60 细胞提取物STING进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (绿色) 及 EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #5488 (红色) ，对未经转染 (左图) 或经 Poly (I:C) (2.5 μg/ml, 6小时; 右图) 转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb（绿色）对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174（80 nM，16 小时）分化，随后转染空载（左图）或转染 poly(dA:dT)（5 μg/mL，3 小时；右图）的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（绿色）对用 TPA #4174（80nM，过夜）（左图）处理后用 LPS（1μg/ml，1 小时）（中图）处理或用 LPS 和 λ 磷酸酶处理（右图）的 THP-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 DY-554 Phalloidin（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 IRF-3 (D6I4C) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经（左）或经 Poly (I:C)（2.5 μg/ml，6 小时；右）转染的 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb，对未经转染 (A) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; B) 转染的野生型小鼠脂肪细胞，及未经转染 (C) 或经 Poly (I:C) (2.5 µg/ml, 6小时; D) 转染的 IRF-3 (-/-) 小鼠脂肪细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-STING (Ser366) (E9A9K) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对用 TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174（80 nM，24 小时）分化，随后不转染（蓝色）或转染 poly(dA:dT)（5 μg/mL，3 小时；绿色）的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 Phospho-TBK1/NAK (Ser172) (D52C2) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对用 TPA（80 nM，4 天）#9905 分化、未经处理（蓝色）或已经过 LPS（1 ug/ml，1 小时；绿色）#14011 处理的 THP-1 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) 兔单克隆抗体对未转染（蓝色）或转染 Poly (I:C)（2.5 μg/ml，6 小时；绿色）的 HT-29 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) ,F (ab') 2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人结肠癌组织进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人前列腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对石蜡包埋的人扁桃体组织进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 36 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb 对石蜡包埋的叙利亚仓鼠子宫组织进行免疫组织化学分析。
    Human-Reactive STING Pathway Antibody Sampler Kit: Image 37 Expand Image
    使用 STING (D2P2F) Rabbit mAb，对石蜡包埋的 HT-29（左图，阳性）和 A549（右图，阴性）细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    图像库
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