Revision 1
Cell Signaling Technology

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For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb 9709 100 µl H M 27 Rabbit IgG
HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb 95357 100 µl H 27 Rabbit IgG

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Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Heat shock protein (HSP) 27 is one of the small HSPs that are constitutively expressed at different levels in various cell types and tissues. Like other small HSPs, HSP27 is regulated at both the transcriptional and posttranslational levels (1). In response to stress, the HSP27 expression increases several-fold to confer cellular resistance to the adverse environmental change. HSP27 is phosphorylated at Ser15, Ser78, and Ser82 by MAPKAPK-2 as a result of the activation of the p38 MAP kinase pathway (2,3). Phosphorylation of HSP27 causes a change in its tertiary structure, which shifts from large homotypic multimers to dimers and monomers (4). It has been shown that phosphorylation and increased concentration of HSP27 modulates actin polymerization and reorganization (5,6).

  1. Stetler, R.A. et al. (2009) Curr Mol Med 9, 863-72.
  2. Landry, J. et al. (1992) J Biol Chem 267, 794-803.
  3. Rouse, J. et al. (1994) Cell 78, 1027-37.
  4. Rogalla, T. et al. (1999) J Biol Chem 274, 18947-56.
  5. Lavoie, J.N. et al. (1993) J Biol Chem 268, 24210-4.
  6. Rousseau, S. et al. (1997) Oncogene 15, 2169-77.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    Revision 1
    #11900

    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet

    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb #95357(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HeLa 细胞(泳道 1)或 HSP27 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。HSP27 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了抗体对 HSP27 的特异性。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb,对 HeLa 或 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析,而 HeLa 或 HT-29 细胞为未经处理 (-) 或经紫外线(40 mJ/cm2,恢复30 分钟)或 Anisomycin(25 μg/mL,30 分钟)进行处理 (+)。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下),对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb,对对照(左)或经 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    对 Hela 细胞提取物 HSP27 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control # 3900 免疫沉淀,泳道 3 为 HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb。使用 HSP27 (G31) Mouse mAb #2402 进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肺进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb(绿色)对 HeLa(左)和 HT-1080(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb,对对照(左)或经紫外线处理(右)的石蜡包埋 HeLa 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 HSP27 (D6W5V) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 HT1080 细胞(蓝色,阴性)和 HeLa 细胞(绿色,阳性)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。

    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    在对照肽(左)或抗原特异性肽(右)存在的情况下,使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb(绿色),对 NIH/3T3 细胞(右)、未经处理(左)或经 λ 磷酸酶处理(中)的 C2C12 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。NIH/3T3 细胞的负染色与 NIH/3T3 细胞在基础条件下不表达 HSP27 的观察结果一致 (5,7)。
    PhosphoPlus® HSP27 (Ser82) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-HSP27 (Ser82) (D1H2F6) XP® Rabbit mAb 对未经处理(蓝色)或经紫外线处理(绿色)的 HeLa 细胞进行流式细胞分析。