Revision 1

#9946Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32) Antibody 9464 20 µl 78 to 82, 95 kDa Rabbit 
Phospho-FoxO1 (Ser256) Antibody 9461 20 µl 82 kDa Rabbit 
Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb 2599 20 µl 65, 78 to 82, 95 kDa Rabbit 
FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 2880 20 µl 78 to 82 kDa Rabbit IgG
Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb 13129 20 µl 97 kDa Rabbit IgG
Phospho-FoxO3a (Ser318/321) Antibody 9465 20 µl 97 kDa Rabbit 
FoxO4 Antibody 9472 20 µl 65 kDa Rabbit 
FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb 12829 20 µl 82 to 97 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

This sampler kit provides an economical means to investigate Forkhead signaling. The kit contains primary and secondary antibodies to perform two Western blots with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The Forkhead family of transcription factors is involved in tumorigenesis of rhabdomyosarcoma and acute leukemias (1-3). Within the family, three members (FoxO1, FoxO4, and FoxO3a) have sequence similarity to the nematode orthologue DAF-16, which mediates signaling via a pathway involving IGFR1, PI3K, and Akt (4-6). Active forkhead members act as tumor suppressors by promoting cell cycle arrest and apoptosis. Increased expression of any FoxO member results in the activation of the cell cycle inhibitor p27 Kip1. Forkhead transcription factors also play a part in TGF-β-mediated upregulation of p21 Cip1, a process negatively regulated through PI3K (7). Increased proliferation results when forkhead transcription factors are inactivated through phosphorylation by Akt at Thr24, Ser256, and Ser319, which results in nuclear export and inhibition of transcription factor activity (8). Forkhead transcription factors can also be inhibited by the deacetylase sirtuin (SirT1) (9).

  1. Anderson, M.J. et al. (1998) Genomics 47, 187-99.
  2. Galili, N. et al. (1993) Nat Genet 5, 230-5.
  3. Borkhardt, A. et al. (1997) Oncogene 14, 195-202.
  4. Nakae, J. et al. (1999) J Biol Chem 274, 15982-5.
  5. Rena, G. et al. (1999) J Biol Chem 274, 17179-83.
  6. Guo, S. et al. (1999) J Biol Chem 274, 17184-92.
  7. Seoane, J. et al. (2004) Cell 117, 211-23.
  8. Arden, K.C. (2004) Mol Cell 14, 416-8.
  9. Yang, Y. et al. (2005) EMBO J 24, 1021-32.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9946

    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit

    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple WesternTM analysis of lysates (0.1 mg/ml) from Jurkat cells using FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb #12829. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。This experiment was performed under reducing conditions on the JessTM Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230kDa.
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb(上)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下),对 293T、MRK-nu-1、Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb(上)或 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb #12829(下),对 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析,而293T 细胞为未处理 (-) 或使用 LY294002 #9901(50 μM,过夜; +)和 Wortmannin #9951(1 μM,过夜;+)进行处理 。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-FoxO1 (Thr24)/(FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb,对用 Calyculin A (#9902) 或 LY294002 (#9901) 处理的 Jurkat 细胞、NIH3T3 细胞和 COS-7 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析,检测分别在 Thr24、Thr32 和 Thr28 位置磷酸化时的 FoxO1、FoxO3a 和 FoxO4(左图)。分别使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb (#2880)、FoxO3a (75D8) Rabbit mAb (#2497) 和 FoxO4 Antibody (#9472)(右图),检测总的 FoxO1、FoxO3a 和 FoxO4 水平。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb(上图)和 FoxO3a (75D8) Rabbit mAb #2497(下图)对 293T 细胞(野生型 (+/+) 或 FoxO1 (-/-))的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-Fox01 (Ser256) Antibody,对血清饥饿或用血清处理的 COS 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Fox01 (Thr24)/Fox03a (Thr32) Antibody,对血清饥饿或用血清处理的 HT29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Fox03a (Ser318/321) Antibody (上)或 Akt Antibody #9272(下),对血清饥饿或使用血清处理的 NIH/3T3 细胞提取物、未处理 (-) 和使用 LY294002/Wortmannin 处理的 MDA-MB-468 细胞提取物,进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Fox04 Antibody 对 Ramos 和 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-FoxO1 (Thr24)/(FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb,对 Calyculin A (#9902) 或 LY294002 (#9901) 处理的 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性的验证是通过蛋白转膜后不用 (-) 或使用 (-) 牛小肠 磷酸酶 (CIP) 处理膜实现的。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb,对 IGROV-1 和 COS-7 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb,对 Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917(左)或 LY294002 #9901(右)处理的石蜡包埋 PC-3(上)和 MRK-nu-1(下)细胞沉淀物,进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类前列腺癌进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    对 C6 提取物 FoxO1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入,泳道 2 为 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb,泳道 3 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900。使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠肺中转移性 SKOV3 肿瘤组织进行免疫组织化学分析。请注意邻近正常肺组织的胞核染色。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb(绿色),对用 Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917(左)或 LY294002 #9901(右)处理的 PC-3 细胞,进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人类淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 FoxO3a Rabbit mAb(实线)对 MRK-nu-1 细胞(蓝色)和 Jurkat 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb,对用 LY294002(左)或 胰岛素(右)处理的石蜡包埋的 IGROV-1 细胞沉淀物,进行免疫组织化学分析。请注意,Akt 激活后 FoxO1 的胞质定位。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb,对石蜡包埋的 SKOV-3 异种移植组织进行免疫组织化学分析。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb(绿色),对用 LY294002(左)或胰岛素(右)处理的 IGROV-1 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。蓝色伪彩 = DRAQ5 (DNA 荧光染料)。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对 HL-60 细胞(蓝色)和 IGROV-1 细胞(绿色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Forkhead Signaling Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对小鼠肝组织的交联染色质与 FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Mouse Pdk4 Promoter Primers #31195、mouse Elk4 upstream primers 和 SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers #7015 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。