Revision 1

#49757Store at -20C

1 个试剂盒

(3 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 8644 20 µl 66 kDa Rabbit IgG
Phospho-Estrogen Receptor α (Ser118) (16J4) Mouse mAb 2511 20 µl 66 kDa Mouse IgG2b
Phospho-Estrogen Receptor α (Ser167) (D5W3Z) Rabbit mAb 64508 20 µl 66 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of estrogen receptor α using phospho-specific and control antibodies. This kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Estrogen receptor α (ERα), a member of the steroid receptor superfamily, contains highly conserved DNA binding and ligand binding domains (1). Through its estrogen-independent and estrogen-dependent activation domains (AF-1 and AF-2, respectively), ERα regulates transcription by recruiting coactivator proteins and interacting with general transcriptional machinery (2). Phosphorylation at multiple sites provides an important mechanism to regulate ERα activity (3-5). Ser104, 106, 118, and 167 are located in the amino-terminal transcription activation function domain AF-1, and phosphorylation of these serine residues plays an important role in regulating ERα activity. Ser118 may be the substrate of the transcription regulatory kinase CDK7 (5). Ser167 may be phosphorylated by p90RSK and Akt (4,6). According to the research literature, phosphorylation at Ser167 may confer tamoxifen resistance in breast cancer patients (4).

  1. Mangelsdorf, D.J. et al. (1995) Cell 83, 835-9.
  2. Glass, C.K. and Rosenfeld, M.G. (2000) Genes Dev 14, 121-41.
  3. Chen, D. et al. (1999) Mol Cell Biol 19, 1002-15.
  4. Campbell, R.A. et al. (2001) J Biol Chem 276, 9817-24.
  5. Chen, D. et al. (2000) Mol Cell 6, 127-37.
  6. Joel, P.B. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 1978-84.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #49757

    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit

    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb #8644 对 MCF7 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118) (16J4) Mouse mAb (上图) 或 control estrogen receptor alpha antibody #2512(下图)， 对未转染的 MCF-7 细胞和经野生型或突变型 ERα 转染且经 EGF 和 E2 刺激的 COS-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-Estrogen Receptor α (Ser167) (D5W3Z) Rabbit mAb（上图）或 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb #8644（下图）对未经处理 (-) 或经过以下所示的处理方法组合处理的 MCF7 细胞进行蛋白质印迹分析：用 Human Epidermal Growth Factor (hEGF) #8916（100ng/ml，15 分钟）或 hEGF 处理，随后再用牛小肠磷酸酶 (CIP) 和 λ 磷酸酶处理。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 ，采用在无酚红培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中培育 4天后，经 β-雌二醇（10 nM）处理 45 分钟的 MCF7 细胞的交联型染色质以及 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。图形显示在 TFF1/pS2 内结合，TFF1/pS2 是一种已知的雌激素受体 α 的靶基因（参见含有 ChIP-qPCR 数据的其他图形）。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对内质网阳性细胞系（MCF7、T-47D、ZR-75-1）和内质网阴性细胞系（SK-BR-3 和 MCF 10A） 提取物进行蛋白质印迹分析。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用CUT&RUNcaica Assay Kit #86652，采用在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中 4 天培育后经 β 雌二醇（10 nM）处理 45 分钟的 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor a (D8H8) Rabbit mAb 或 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb #13258 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示贯穿 TFF1 基因的结合作用。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118) (16J4) Mouse mAb，对石蜡包埋且显示核定位的人乳腺癌组织进行磷酸化雌激素受体 α 免疫组织化学染色。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Estrogen Receptor α (Ser167) (D5W3Z) Rabbit mAb（绿色），对未处理的（左上图）、经 Human Epidermal Growth Factor (hEGF) #8916（10 ng/mL，30 分钟；右上图）刺激或经 hEGF 刺激后再使用 λ 磷酸酶后处理（左下图）的血清饥饿 MCF7 细胞（ERα 阳性）进行共聚焦免疫荧光分析。经 hEGF 处理的 SK-BR-3 细胞（ERα 阴性；右下图）包括在内，作为附加阴性对照。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 ，采用在无酚红培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中培育 4天，，然后经 β-雌二醇（10 nM）处理 45 分钟的 MCF7 细胞的交联型染色质以及 5 μl Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在染色体 21（上图）内的结合，包括 Estrogen Receptor α 的已知靶标基因 TFF1/pS2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用CUT&RUNcaica Assay Kit #86652，采用在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中 4 天培育后经 β 雌二醇（10 nM）处理 45 分钟的 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor a (D8H8) Rabbit mAb 或 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb #13258 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制备 DNA 库。该图显示贯穿染色体 21（上图）（包括 TFF1 基因（下图））的结合作用。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对在无酚红的培养基和 5% 活性碳剥离的 FBS 中生长4天，然后使用 β-雌二醇（10 nM，45 分钟）处理的 MCF7 细胞中提取的交联染色质，在加入 Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG#2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ESR1 Promoter Primers #9673、SimpleChIP® Human pS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Estrogen Receptor α Activation Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，采用在无酚红培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 中培育 4 天 ，然后经 β-雌二醇（10 nM ）处理 45 分钟 MCF7 细胞和 Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® Human PS2 Promoter Primers #9702 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 定量富集的 DNA。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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