Revision 1

#88548Store at -20C

1 个试剂盒

(3 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 5032 20 µl 200 kDa Rabbit IgG
DNMT3A (E9P2F) Rabbit mAb 49768 20 µl 85, 95, 130 kDa Rabbit IgG
DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb 57868 20 µl 96 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The DNA Methylation Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting DNA methyltransferase enzymes. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibodies.

Background

Methylation of DNA at cytosine residues in mammalian cells is a heritable, epigenetic modification that is critical for proper regulation of gene expression, genomic imprinting and development (1,2). Three families of mammalian DNA methyltransferases have been identified: DNMT1, DNMT2, and DNMT3 (1,2). DNMT1 is constitutively expressed in proliferating cells and functions as a maintenance methyltransferase, transferring proper methylation patterns to newly synthesized DNA during replication. DNMT3A and DNMT3B are strongly expressed in embryonic stem cells with reduced expression in adult somatic tissues. DNMT3A and DNMT3B function as de novo methyltransferases that methylate previously unmethylated regions of DNA. DNMT2 is expressed at low levels in adult somatic tissues and its inactivation affects neither de novo nor maintenance DNA methylation. DNMT1, DNMT3A, and DNMT3B together form a protein complex that interacts with histone deacetylases (HDAC1, HDAC2, Sin3A), transcriptional repressor proteins (RB, TAZ-1), and heterochromatin proteins (HP1, SUV39H1) to maintain proper levels of DNA methylation and facilitate gene silencing (3-8). Improper DNA methylation contributes to diseased states such as cancer (1,2). Hypermethylation of promoter CpG islands within tumor suppressor genes correlates with gene silencing and the development of cancer. In addition, hypomethylation of bulk genomic DNA correlates with and may contribute to the onset of cancer. DNMT1, DNMT3A, and DNMT3B are overexpressed in many cancers, including acute and chronic myelogenous leukemias, in addition to colon, breast, and stomach carcinomas (9-12).

  1. Hermann, A. et al. (2004) Cell. Mol. Life Sci. 61, 2571-87.
  2. Turek-Plewa, J. and Jagodziński, P.P. (2005) Cell. Mol. Biol. Lett. 10, 631-47.
  3. Kim, G.D. et al. (2002) EMBO J. 21, 4183-95.
  4. Fuks, F. et al. (2001) EMBO J. 20, 2536-44.
  5. Geiman, T.M. et al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Commun. 318, 544-55.
  6. Rountree, M.R. et al. (2000) Nat. Genet. 25, 269-77.
  7. Pradhan, S. and Kim, G.D. (2002) EMBO J. 21, 779-88.
  8. Fuks, F. et al. (2003) Nucleic Acids Res. 31, 2305-12.
  9. Mizuno, S. et al. (2001) Blood 97, 1172-9.
  10. Robertson, K.D. et al. (1999) Nucleic Acids Res. 27, 2291-8.
  11. Xie, S. et al. (1999) Gene 236, 87-95.
  12. Kanai, Y. et al. (2001) Int. J. Cancer 91, 205-12.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #88548

    DNA Methylation Antibody Sampler Kit

    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 DNMT3A (E9P2F) 兔单克隆抗体对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb ，对 293 细胞和 F9 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 DNMT3B (E8A8A) XP® 兔单克隆抗体对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    CUT&Tag was performed with NCCIT cells and DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb, using CUT&Tag Assay Kit #77552. DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. The figure shows binding across the HUWE1 gene.
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb 或 DNMT3B (E2Q3Z) Rabbit mAb #72335 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。图形显示在 HUWE1 内结合，HUWE1 是一种已知的 DNMT3B 靶标基因（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    对 NCCIT 细胞提取物 DNMT3A 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900，泳道 3 为 DNMT3A (E9P2F) 兔单克隆抗体。使用 DNMT3A (E9P2F) 兔单克隆抗体进行蛋白质印迹分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb（绿色）对 COS 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人软组织鳞状细胞癌组织进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    对 NCCIT 细胞提取物 DNMT3B 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 敲入，泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900，泳道 3 为 DNMT3B (E8A8A) XP® 兔单克隆抗体。使用 DNMT3B (E8A8A) XP® 兔单克隆抗体和小鼠抗兔 IgG (特定构象) (L27A9) 单克隆抗体 (HRP 偶联物) #5127 进行蛋白印迹分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    CUT&Tag was performed with NCCIT cells and DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb, using CUT&Tag Assay Kit #77552. DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. The figures show binding across the HUWE1 gene (upper) and the SMARCA1 gene (lower).
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb 或 DNMT3B (E2Q3Z) Rabbit mAb #72335 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在 DNMT3B 的已知靶基因 HUWE1（上图）和 SMARCA1（下图）内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 SimpleChIP Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCCIT 细胞的交联染色质与 DNMT3A (E9P2F) Rabbit mAb 或 DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAb #32578 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 DNMT3A 的已知靶基因 HUWE1 内结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb（实线）对 COS7 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L) F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人胸腺进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 DNMT3B (E8A8A)兔 XP® 单克隆抗体（绿色）对 NCCIT 细胞（左图，高表达）、HCT 116 DNMT3B 野生型细胞（中间，低表达）和 HCT 116 DNMT3B 敲除型细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 NCCIT 细胞和 DNMT3B (E8A8A) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 检测。使用 human HUWE1 intron 26 primers、human ARHGEF2 promoter primers 和 SimpleChIP® Human GAPDH Exon 1 Primers #5516，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCCIT 细胞的交联染色质与 DNMT3A (E9P2F) Rabbit mAb #49768 或 DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAb #32578 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 DNMT3A 的已知靶基因 HUWE1 （上图）和 ARHGEF2（下图）内结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人睾丸进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 DNMT3A (E8A8A) XP® 兔单克隆抗体（实线）或浓度匹配的兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900（虚线）对 NCCIT 细胞（绿色）、HCT116 WT 细胞（红色）或 HCT116 DNMT3B KO 细胞（蓝色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 NCCIT 细胞的交联染色质与 DNMT3A (E9P2F) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human HUWE1 Intron 26 Control Primers #33770、human ARHGEF2 intron 13 primers、human SDHAP1 intron 10 primers 和 SimpleChIP® Human GAPDH Exon 1 Primers #5516 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人淋巴结进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对 NCCIT 细胞的交联染色质与 DNMT3B (E8A8A) XP® 兔单克隆抗体#57868 或 正常兔 IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® 人源 EIF4G1 内含子 8 引物 #29118、人源 CROCC 内含子 1 引物 和 SimpleChIP® 人源 GAPDH 启动子引物 #4471 进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb（左图）或 DNMT1 Rabbit mAb（右图）对石蜡包埋的正常人胎盘进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 DNMT1 上独特的、不重叠的表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的人乳腺导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb 对未经处理（左图）或已经过 Doxycycline（10 µg/ml，72 小时；右图）处理的石蜡包埋的 HCT 116 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    DNA Methylation Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以来自均经多柔比星（1 μM，24 小时）处理的 HCT116 野生型细胞（左图）与 HCT116 DNMT3B/DNMT1 双敲除型细胞（右图）中的交联染色质和 DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb #5032 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用人 POMC 启动子引物和人 Stat2 启动子引物，通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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