Revision 1
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P16220

Entrez-Gene Id:

1385

Product Information

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb detects endogenous levels of CREB only when phosphorylated at Ser133. This antibody also detects the phosphorylated form of CREB-related protein ATF-1. CREB (48H2) Rabbit mAb detects endogenous levels of total CREB protein.

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser133 of human CREB (Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb), or with a synthetic peptide corresponding to residues near the carboxy-terminus of human CREB (CREB (48H2) Rabbit mAb).

Product Description

The PhosphoPlus CREB (Ser133) Antibody Kit provides reagents and protocols for the rapid analysis of the phosphorylation status of CREB at Ser133.

Background

CREB is a bZIP transcription factor that activates target genes through cAMP response elements. CREB is able to mediate signals from numerous physiological stimuli, resulting in regulation of a broad array of cellular responses. While CREB is expressed in numerous tissues, it plays a large regulatory role in the nervous system. CREB is believed to play a key role in promoting neuronal survival, precursor proliferation, neurite outgrowth, and neuronal differentiation in certain neuronal populations (1-3). Additionally, CREB signaling is involved in learning and memory in several organisms (4-6). CREB is able to selectively activate numerous downstream genes through interactions with different dimerization partners. CREB is activated by phosphorylation at Ser133 by various signaling pathways, including Erk, Ca2+, and stress signaling. Some of the kinases involved in phosphorylating CREB at Ser133 are p90RSK, MSK, CaMKIV, and MAPKAPK-2 (7-9).

  1. Lonze, B.E. et al. (2002) Neuron 34, 371-85.
  2. Lee, M.M. et al. (1999) J Neurosci Res 55, 702-12.
  3. Redmond, L. et al. (2002) Neuron 34, 999-1010.
  4. Dash, P.K. et al. (1990) Nature 345, 718-21.
  5. Yin, J.C. et al. (1994) Cell 79, 49-58.
  6. Guzowski, J.F. and McGaugh, J.L. (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94, 2693-8.
  7. Xing, J. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 1946-55.
  8. Ribar, T.J. et al. (2000) J Neurosci 20, RC107.
  9. Tan, Y. et al. (1996) EMBO J 15, 4629-42.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#9190

PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit

PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 1 Expand Image
使用经 Forskolin # 3828 (30 μm) 处理 1 小时的 293 细胞以及 CREB (48H2) Rabbit mAb 或 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit Mab #9198,通过 CUT&RUN Assay Kit #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在 NR4A3 基因内结合。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 2 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb #9198 对经毛喉素处理(30uM,30 分钟)和 IBMX处理(0.5mM,30 分钟)的 SK-N-MC 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。该抗体也检出磷酸化形式的 CREB 相关蛋白——ATF-1 (如所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上还原条件下进行该实验。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 3 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 4 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 5 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb #9198 (上图)和 CREB (48H2) Rabbit mAb #9197(下图),对未经处理或经 Forskolin#3828 (30 μM) 处理和 IBMX (0.5 mM) 处理 30 分钟(+)的 SK-N-MC 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 6 Expand Image
使用 CREB (48H2) Rabbit mAb,对 SK-N-MC、COS、NIH/3T3、C6 和果蝇 S2 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 7 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb(上)或 CREB (48H2) Rabbit mAb #9197 (下),对未处理或经毛喉素处理和 FGF 处理的 SK-N-MC 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 8 Expand Image
对 SK-N-MC 细胞提取物中的 CREB 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 CREB (48H2) Rabbit mAb,泳道 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP2® Isotype Control #3900,泳道 3 为 10% input。使用 CREB (86B10) Mouse mAb #9104 进行蛋白质印迹分析。Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 用作二抗。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 9 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析,并显示胞核染色。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 10 Expand Image
使用 CREB (48H2) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人星形细胞瘤进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 11 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠肺进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 12 Expand Image
使用 CREB (48H2) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 13 Expand Image
在对照肽(左)或 Phospho-CREB (Ser133) Blocking Peptide #1090(右)存在的情况下,使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb,对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 14 Expand Image
使用 CREB (48H2) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 15 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb,对未处理(左)或经 IBMX 及毛喉素处理(右)的石蜡包埋的 SK-N-MC 细胞进行的免疫组织化学分析,显示诱导的胞核着染。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 16 Expand Image
使用 CREB (48H2) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠脑进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 17 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb,对未处理(左)或 λ 磷酸酶处理(右)的石蜡包埋的人肾细胞癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 18 Expand Image
对用 CREB (48H2) Rabbit mAb(红色)和 Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb #2835(绿色)标记的小鼠小脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 19 Expand Image
对用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb(红色)、Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb #2835(蓝色)和 Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (2F9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4854 标记的接受假手术(左图)或让之缺血 15 分钟随后再灌注 30 分钟(中图)和 4 小时(右图)的大鼠齿状回细胞进行共聚焦免疫荧光图像分析。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 20 Expand Image
使用与同工型对照物 (B) 相对的 CREB (48H2) Rabbit mAb(A,红色),对显示胞核染色的 SK-N-MC 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5®(DNA 荧光染料)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 21 Expand Image
与未处理细胞(右)相比,使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb(左,红),对 Forskolin 和 IBMX 处理 25 分钟后显示核染色的 SK-N-MC 细胞进行共聚焦显微镜图像。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 22 Expand Image
相比浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线), 使用 CREB (48H2) Rabbit mAb(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 23 Expand Image
使用 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经过处理(蓝色)或经过 TPA #4174 (500nM) 和碘霉素#9995(1 µM,4 小时;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 24 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经 Forskolin #3828 (30 μM) 处理 1 小时的 293 细胞的交联染色质与 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb 或 CREB (48H2) Rabbit mAb (#9197) 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示与 NR4A3 结合,NR4A3 是磷酸 CREB 和 CREB 的一个已知靶标基因(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 25 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对经 Forskolin #3828(30 μM,1 小时)处理的 293 细胞的交联染色质与 10 μl CREB (48H2) Rabbit mAb 或 2 μl Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用人 ALS2 外显子 1 引物、SimpleChIP® Human NR4A3 Promoter Primers #4829 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 26 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经 Forskolin #3828 (30 μM) 处理 1 小时的 293 细胞的交联染色质与 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb 或 CREB (48H2) Rabbit mAb (#9197) 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体9(上图)内的结合,包括 Phospho-CREB 和 CREB 的已知靶标基因 NR4A3 (下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 27 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对经 Forskolin #3828 (30 μM) 处理 1 小时的 293 细胞的交联染色质与 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用人 ALS2 外显子 1 引物、SimpleChIP® Human NR4A3 Promoter Primers #4829 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 28 Expand Image
使用经 Forskolin # 3828 (30 μm) 处理 1h 的 293 细胞和 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit Mab,通过 CUT&RUN Assay Kit #86652进行 CUT&RUN。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 NR4A3 基因内结合。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 29 Expand Image
使用经 Forskolin # 3828 (30 μm) 处理 1h 的 293 细胞和 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit Mab,通过 CUT&RUN Assay Kit #86652进行 CUT&RUN。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-Seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 9号染色体(上图)内的结合,包括 NR4A3 基因(下图)。
PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Kit: Image 30 Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,通过用 Forskolin #3828 (30 μM) 处理 1h 的293 细胞和 Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362,进行CUT&RUN。使用人源ALS2 外显子 1 引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。