Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P09874

Entrez-Gene Id:

142

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb 5625 100 µl H Mk 89 Rabbit IgG
PARP (46D11) Rabbit mAb 9532 100 µl H M R Mk 116, 89 Rabbit 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

PARP, a 116 kDa nuclear poly (ADP-ribose) polymerase, appears to be involved in DNA repair in response to environmental stress (1). This protein can be cleaved by many ICE-like caspases in vitro (2,3) and is one of the main cleavage targets of caspase-3 in vivo (4,5). In human PARP, the cleavage occurs between Asp214 and Gly215, which separates the PARP amino-terminal DNA-binding domain (24 kDa) from the carboxy-terminal catalytic domain (89 kDa) (2,4). PARP helps cells to maintain their viability; cleavage of PARP facilitates cellular disassembly and serves as a marker of cells undergoing apoptosis (6).

  1. Satoh, M.S. and Lindahl, T. (1992) Nature 356, 356-358.
  2. Lazebnik, Y. A. et al. (1994) Nature 371, 346-347.
  3. Cohen, G.M. (1997) Biochem. J. 326, 1-16.
  4. Nicholson, D. W. et al. (1995) Nature 376, 37-43.
  5. Tewari, M. et al. (1995) Cell 81, 801-809.
  6. Oliver, F.J. et al. (1998) J. Biol. Chem. 273, 33533-33539.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

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    Revision 1
    #12061

    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb #5625 对经过 Etoposide(25 μM,5 小时)处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 PARP (46D11) Rabbit mAb #9532 对经过 Etoposide(25 uM,5 小时)处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    Enhanced cross-linking and immunoprecipitation (eCLIP) was performed with RNA from K-562 cells and PARP (46D11) Rabbit mAb using a protocol based on the RBP-eCLIP method from Eclipsebio. The figure shows binding across the GET4 transcript. 数据由 Gene Yeo 博士的实验室友情提供,并经许可使用。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb(上)或总 PARP Antibody #9542(下),对未经或经 Staurosporine #9953 (1 μM,3 hr) 处理的 HeLa 细胞、未经或经 etoposide (25 μM, overnight) 处理的 Jurkat 细胞、未经或经 cycloheximide(CHX,10 μg/ml,过夜)处理,然后再进行 TNF-α 8902 (20 ng/ml,4 hr) 处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 PARP (46D11) Rabbit mAb #9532(上图)或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照 HEK293 细胞(泳道1)或 PARP 敲除型 HEK293 细胞(泳道2提取物进行蛋白质印迹法分析。PARP 敲除型 HEK293 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 PARP 的特异性。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 PARP (46D11) Rabbit mAb 对未处理或经 TNF-α 和 cycloheximide 处理的 THP-1 细胞提取物、以及 SW620 和 A20 细胞系的对照提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP®Rabbit mAb(绿色),对未经(左)或经 Staurosporine #9953(右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin 标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色)或已经过 Etoposide #2200(25 uM, 18 小时;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。