Revision 3

#9929Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 9664 20 µl 17, 19 kDa Rabbit IgG
Cleaved Caspase-6 (Asp162) Antibody 9761 20 µl 18 kDa Rabbit 
Cleaved Caspase-7 (Asp198) (D6H1) Rabbit mAb 8438 20 µl 18 kDa Rabbit IgG
Cleaved Caspase-9 (Asp330) (E5Z7N) Rabbit mAb 52873 20 µl 37 kDa Rabbit IgG
Cleaved Caspase-9 (Asp315) Antibody 9505 20 µl 35 kDa Rabbit 
Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb 5625 20 µl 89 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation status of caspases by detecting their cleaved forms. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Apoptosis is a regulated physiological process leading to cell death. Caspases, a family of cysteine acid proteases, are central regulators of apoptosis. Initiator caspases (including 8, 9, 10, and 12) are closely coupled to proapoptotic signals. Once activated, these caspases cleave and activate downstream effector caspases (including 3, 6, and 7), which in turn cleave cytoskeletal and nuclear proteins like PARP, α-fodrin, DFF, and lamin A and induce apoptosis. Cytochrome c released from mitochondria is coupled to the activation of caspase-9, a key initiator caspase (1). Proapoptotic stimuli include FasL, TNF-α, DNA damage and ER stress. Fas and TNFR activate caspase-8 and -10 (2), DNA damage leads to the activation of caspase-9 and ER stress leads to the calcium-mediated activation of caspase-12 (3). The inhibitor of apoptosis protein (IAP) family includes XIAP and survivin and functions by binding and inhibiting several caspases (4,5). Smac/Diablo, a mitochondrial protein, is released into the cytosol upon mitochondrial stress and competes with caspases for binding of IAPs. The interaction of Smac/Diablo with IAPs relieves the inhibitory effects of IAPs on caspases (6).

  1. Baker, S.J. and Reddy, E.P. (1998) Oncogene 17, 3261-3270.
  2. Budihardjo, I. et al. (1999) Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15, 269-290.
  3. Nakagawa, T. et al. (2000) Nature 403, 98-103.
  4. Deveraux, Q. L. et al. (1998) EMBO J. 17, 2215-2223.
  5. Li, F. et al. (1998) Nature 396, 580-584.
  6. Du, C. et al. (2000) Cell 102, 33-42.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 3
    #9929

    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit

    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb #5625 对经过 Etoposide(25 μM,5 小时)处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664 对经过细胞色素 C 处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-9 (Asp330) (E5Z7N) 兔单克隆抗体(上图)、Caspase-9 (C9) 小鼠单克隆抗体 #9508(中间)或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457(下图)对未经 (-) 或已经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时;+)或 Etoposide #2200(25 μM,过夜;+)处理的 HeLa 和 Jurkat 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb(上)或总 PARP Antibody #9542(下),对未经或经 Staurosporine #9953 (1 μM,3 hr) 处理的 HeLa 细胞、未经或经 etoposide (25 μM, overnight) 处理的 Jurkat 细胞、未经或经 cycloheximide(CHX,10 μg/ml,过夜)处理,然后再进行 TNF-α 8902 (20 ng/ml,4 hr) 处理的 THP-1 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-7 (Asp198) (D6H1) Rabbit mAb(上)和 Caspase-7 Antibody #9492(下),对未经 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM, 3 hr) 处理的 HeLa、C2C12 和 H-4-II-E 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-9 (Asp315) Antibody(上图)或 Caspase-9 Antibody #9502(下图),对未经处理或经过细胞色素 C 处理 (0.25 mg/ml) 的 Jurkat 细胞提取物,以及对未经处理、经过 staurosporine 处理(1 µM) 或经过细胞色素 C 处理 (0.25 mg/ml) 的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 staurosporine #9953(1uM,3 小时)或 etoposide #2200(25uM,5 小时)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人源)提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-6 (Asp162) Antibody #9761(上图)、Caspase-6 Antibody #9762(中图)和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对未经处理或经过细胞色素 c(1 小时,体外 0.25mg/ml)或 raptinal(10 μM,2 小时)处理的不同细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-9 (Asp330) (E5Z7N) 兔单克隆抗体(绿色)对未经(左图)或已经 Staurosporine #9953(1 μM,3 小时;右图)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight 554 Phalloidin #13054(红色)标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-7 (Asp198) (D6H1) Rabbit mAb(绿色),对未经(左)或经 Staurosporine #9953(1 μM,3小时,右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 etoposide(25uM, 5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物进行免疫沉淀法。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP®Rabbit mAb(绿色),对未经(左)或经 Staurosporine #9953(右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin 标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-7 (Asp198) (D6H1) Rabbit mAb,对未经(蓝色)或经 etoposide 处理(绿色)的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色)或已经过 Etoposide #2200(25 uM, 18 小时;绿色)处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    在对照肽(左)或 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide (#1050)(右)存在的情况下,使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 在 SignalSlide® Cleaved Caspase-3 IHC Controls #8104 上对石蜡包埋的未经处理(左图)或经过依托泊苷处理(右图)的 Jurkat 细胞进行免疫组织化学分析。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学染色,以显示凋亡细胞细胞浆定位。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb(绿色)标记的且未经(左)或经(右)Staurosporine #9953 处理的 HT-29 细胞的共聚焦免疫荧光图像。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Cleaved Caspase Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用与非特异性的阴性对照抗体(红色)作为 Caspase-3(Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 的对照,对未经(蓝色)或已经(绿色)etoposide #2200 处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。