Revision 2
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#O96017

Entrez-Gene Id:

11200

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 2197 100 µl H 62 Rabbit IgG
Chk2 (D9C6) Rabbit mAb 6334 100 µl H 62 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Chk2 is the mammalian orthologue of the budding yeast Rad53 and fission yeast Cds1 checkpoint kinases (1-3). The amino-terminal domain of Chk2 contains a series of seven serine or threonine residues (Ser19, Thr26, Ser28, Ser33, Ser35, Ser50, and Thr68) each followed by glutamine (SQ or TQ motif). These are known to be preferred sites for phosphorylation by ATM/ATR kinases (4,5). After DNA damage by ionizing radiation (IR), UV irradiation, or hydroxyurea treatment, Thr68 and other sites in this region become phosphorylated by ATM/ATR (5-7). The SQ/TQ cluster domain, therefore, seems to have a regulatory function. Phosphorylation at Thr68 is a prerequisite for the subsequent activation step, which is attributable to autophosphorylation of Chk2 at residues Thr383 and Thr387 in the activation loop of the kinase domain (8).

  1. Allen, J.B. et al. (1994) Genes Dev. 8, 2401-2415.
  2. Weinert, T.A. et al. (1994) Genes Dev. 8, 652-665.
  3. Murakami, H. and Okayama, H. (1995) Nature 374, 817-819.
  4. Kastan, M.B. and Lim, D.S. (2000) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1, 179-186.
  5. Matsuoka, S. et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 10389-10394.
  6. Melchionna, R. et al. (2000) Nat. Cell Biol. 2, 762-765.
  7. Ahn, J.Y. et al. (2000) Cancer Res. 60, 5934-5936.
  8. Lee, C.H. and Chung, J.H. (2001) J. Biol. Chem. 276, 30537-30541.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

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    Revision 2
    #12298

    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb #2197 对经过紫外线(50 mJ,恢复 30 分钟)处理的 HEK 293 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 对来自未经处理或 UV 处理的 Hela 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Chk2 (D9C6) Rabbit mAb(上图)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对对照 HeLa 细胞(泳道 1)或 Chk2 编码基因出现靶突变的 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。突变 HeLa 细胞中 Chk2 分子量的变化证实了抗体对 Chk2 的特异性。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb,对经过 UV 处理的 HT29 细胞的磷酸-chk2 进行免疫沉淀,随后使用相同抗体进行蛋白质印迹。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Chk2 (D9C6) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Chk2 (D9C6) Rabbit mAb(泳道 2)对 293 细胞提取物的 Chk2 进行免疫沉淀分析。使用相同的抗体进行蛋白质印迹检测。泳道 1 是 10% 输入对照。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的对照(左)或 λ 磷酸酶处理(右)的人结肠癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经(蓝色)或已经紫外线 (mJ/cm,恢复 2 小时;绿色)处理的 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 用作二抗。
    PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb 对未经处理(左图)或经过紫外线处理(100 mJ,2 小时复原,右图)的石蜡包埋的对照(上图)或 CRISPR/Cas9 Chk2 敲除型 (KO) 的 HCT 116 细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。