Revision 2

#9870Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb 4539 20 µl 34 kDa Rabbit 
Cyclin A2 (BF683) Mouse mAb 4656 20 µl 55 kDa Mouse IgE
Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb 12231 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
Cyclin E2 Antibody 4132 20 µl 48 kDa Rabbit 
Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb 3377 20 µl 17 kDa Rabbit IgG
Myt1 Antibody 4282 20 µl 60 to 70 kDa Rabbit 
p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 2947 20 µl 21 kDa Rabbit IgG
Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb 4910 20 µl 95 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Cell Cycle Regulation Sampler Kit II provides an economical means of evaluating cell cycle proteins. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The critical regulatory step in activating cdc2 during progression into mitosis appears to be dephosphorylation of cdc2 at Tyr15 and Thr14 (1). Phosphorylation of cdc2 by the protein kinases Wee1 and Myt1 at Thr14 and Tyr15 results in inhibition of cdc2 (2,3). Progression through the G1/S checkpoint and initiation of DNA replication requires cyclin E; traversing the G2/M checkpoint to initiate mitosis requires cyclin B, and cyclin A may be required for both S-phase and M-phase (4). The versatile p21 cyclin-dependent kinase inhibitor, which interacts with several cyclin-CDK complexes to regulate cyclin-CDK during the cell cycle, is regulated by phosphorylation and ubiquitin-mediated degradation (5). Phosphorylation of histone H3 at Ser10 and neighboring residues correlates with chromosomal condensation, which is essential for segregation of chromosomes during mitosis (6).

  1. Norbury, C. et al. (1991) EMBO J 10, 3321-9.
  2. McGowan, C.H. and Russell, P. (1993) EMBO J 12, 75-85.
  3. Wells, N.J. et al. (1999) J Cell Sci 112 ( Pt 19), 3361-71.
  4. Pagano, M. et al. (1992) EMBO J 11, 961-71.
  5. Abbas, T. and Dutta, A. (2009) Nat Rev Cancer 9, 400-14.
  6. Hendzel, M.J. et al. (1997) Chromosoma 106, 348-60.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 2
    #9870

    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II

    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from HeLa cells using Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb #12231. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 2 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb #2947 对 MCF-7 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 3 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 4 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对对照的 HeLa 细胞（泳道 1）或 p21 Waf1/Cip1 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）进行蛋白印迹分析。p21 Waf1/Cip1 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 p21 Waf1/Cip1 的特异性。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb #3377（上）或 Histone H3 Antibody #9715（下），对未处理或使用 Nocodazole（100 ng/ml 处理 18 小时）处理的 HeLa 细胞提取物，进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性的显示是进一步使用 λ-磷酸酶处理细胞裂解物。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 6 Expand Image
    使用 Cyclin E2 Antibody 对未经处理或经蛋白酶体抑制剂 MG-132 处理的 MCF-7、SK-N-MC 和 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 7 Expand Image
    使用 Myt1 Antibody 对未处理（泳道 1）、诺考达唑处理 (50 ng/ml，泳道 2) 或 UV 处理（泳道 3）的 HT29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（上图）或 cdc2 Antibody #77055（下图），对未经 (-) 或已经 诺考达唑（0.1 μg/ml，18 小时；+）处理的 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 9 Expand Image
    使用 Cyclin A2 (BF683) Mouse mAb，对未经处理、经 Doxorubicin（0.5 µM，24 小时）或 Nocodazole（50 ng/ml，24 小时）处理的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb（上）或 Wee1 Antibody #4936（下），对未经处理或经 EGF 处理的 A431 和 H441 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 11 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 13 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）通过胸腺嘧啶核苷双阻断法 (2 nM, 16 hr) 进行 S 期同步，之后在指定时间内释放到新鲜培养基的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 14 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对不同细胞类型的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb（绿色），对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 16 Expand Image
    使用 Myt1 Antibody 对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析，显示其核定位和胞质定位。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb 对未经处理或经羟基脲处理 20 小时的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb，对未经处理或经 EGF 处理的 A431 细胞磷酸化 wee1 进行免疫沉淀，随后使用相同抗体进行蛋白质印迹。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 19 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 20 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb #2947 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 ，对 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® p21 Waf1/Cip1 siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 确认 p21 Waf1/Cip1 表达的沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 用作 p21 Waf1/Cip1 siRNA 的上样和特异性对照。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 21 Expand Image
    与碘化丙啶（DNA 含量）相比较，使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb，对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。框内细胞群是 Phospho-Histone H3 (Ser10) 阳性细胞。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 22 Expand Image
    使用 Myt1 Antibody 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 23 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 的 p21 进行免疫沉淀。使用相同的抗体进行蛋白质印迹检测。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 24 Expand Image
    使用 Myt1 Antibody 对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 25 Expand Image
    对用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（绿色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（红色）标记的非同步 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 26 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（左图）作为对照，使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（右图）和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 27 Expand Image
    在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）存在的情况下，使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 28 Expand Image
    在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）存在的情况下，使用 Myt1 Antibody 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 29 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb，对 SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568（左）或 SignalSilence® p21 Waf1/Cip1 siRNA II #6558（右）转染的石蜡包埋 HeLa 细胞进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 30 Expand Image
    使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb（红色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（绿色）对 MCF7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 31 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（右图）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（左图）和共同染色的 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cell Cycle Regulation Antibody Sampler Kit II: Image 32 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（左图）作为对照，使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb（右图）和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Daudi 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
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