Revision 1

#17498Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 52508 20 µl 25 kDa Rabbit IgG
CDT1 (D10F11) Rabbit mAb 8064 20 µl 65 kDa Rabbit IgG
Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb 28755 20 µl 26 kDa Rabbit IgG
Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP® Rabbit mAb 53348 20 µl 17 kDa Rabbit IgG
Cyclin A2 (E1D9T) Rabbit mAb 91500 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb 12231 20 µl 55 kDa Rabbit IgG
Cyclin E1 (D7T3U) Rabbit mAb 20808 20 µl 48 kDa Rabbit IgG
Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb 4539 20 µl 34 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting total proteins or post-translational modifications present in cells at various phases of the cell cycle. Geminin is degraded in G1 phase, while CDT1 is degraded in S, G2, and M phases. Thymidine Kinase 1 accumulates in G1 phase, peaks in S phase, and is degraded before cell division. Phospho-Histone H3 (Ser10) is present only in M phase, while Phospho-cdc2 (Tyr15) is absent in M phase. Cyclins A2, B1, and E1 peak at G2 phase, late G2/M phase, and late G1/early S phase, respectively. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The entry of eukaryotic cells into mitosis is regulated by cdc2/CDK1 kinase activation, a process controlled at several steps including cyclin B1 nuclear accumulation and binding, and phosphorylation of cdc2/CDK1 at Thr161 (1). At the end of mitosis, cyclin B1 is targeted for degradation by the anaphase-promoting complex (APC), allowing for cell cycle progression (2). A critical regulatory step in activating cdc2 during progression into mitosis is dephosphorylation of cdc2/CDK1 at Thr14 and Tyr15 (3).
Phosphorylation of Histone H3 at Ser10 is tightly correlated with chromosome condensation during both mitosis and meiosis (4).
Overcoming the G1/S checkpoint to commence DNA replication requires cyclin E, traversing the G2/M checkpoint to initiate mitosis requires cyclin B, and cyclin A is required for both S-phase and M-phase (5). Cyclin A availability is apparently the rate-limiting step for entry into mitosis, and cyclin A is required for completion of prophase (6).
Thymidine kinases play a critical role in generating the DNA synthetic precursor deoxythymidine triphosphate (dTTP). Cytoplasmic thymidine kinase 1 (TK1) expression and activity are regulated in a cell cycle-dependent manner, accumulating during G1-phase to peak levels in S-phase before being degraded prior to cell division (7).
The initiation of S phase begins with the formation of the pre-replication complex (pre-RC) in late mitosis/early G1 phase. CDT1 and cdc6 bind to the origin of DNA replication, which allows binding of the MCM2-7 complex. In order to ensure that replication occurs only once per cell cycle, geminin inhibits and destabilizes CDT1 during the S, G2 and M phases. At the metaphase/anaphase transition, geminin is degraded by the anaphase-promoting complex (APC) allowing for the formation of new pre-RC (8).

  1. Atherton-Fessler, S. et al. (1994) Mol Biol Cell 5, 989-1001.
  2. Gong, D. and Ferrell, J.E. (2010) Mol Biol Cell 21, 3149-61.
  3. Norbury, C. et al. (1991) EMBO J 10, 3321-9.
  4. Hendzel, M.J. et al. (1997) Chromosoma 106, 348-60.
  5. Pagano, M. et al. (1992) EMBO J 11, 961-71.
  6. Furuno, N. et al. (1999) J Cell Biol 147, 295-306.
  7. Munch-Petersen, B. (2010) Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 29, 363-9.
  8. Caillat, C. and Perrakis, A. (2012) Subcell Biochem 62, 71-87.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 5,675,063.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #17498

    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit

    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from HeLa cells using Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb #12231. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    Simple WesternTM analysis of lysates (0.1 mg/mL) from Jurkat cells using Cyclin A2 (E1D9T) Rabbit mAb #91500. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。This experiment was performed under reducing conditions on the JessTM Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230 kDa separation module.
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Cyclin E1 (D7T3U) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对空载处理 (-) 或经 aphidicolin 处理（10 μg/ml，24 小时；+）的 HT-29 细胞和野生型 (-) 或胸苷激酶 1 敲除型 (+) HCT 116 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（上图）或 cdc2 Antibody #77055（下图），对未经 (-) 或已经 诺考达唑（0.1 μg/ml，18 小时；+）处理的 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP® Rabbit mAb (上图) 或 Histone H3 (D1H2) Rabbit mAb #4499 (下图)，对未经处理的或经 Nocodazole #2190 (100ng/ml,16小时) 处理的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。该抗体的磷酸特异性的显示是进一步使用 λ-磷酸酶处理细胞裂解物。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 CDT1 (D10F11) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Cyclin A2 (E1D9T) 兔单克隆抗体（上图）或 β-肌动蛋白 (D6A8) 兔单克隆抗体 #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。在泳道 6 中，HT-29 细胞用 aphidicolin（10 µg/ml，24 小时）处理，让细胞富集在 G1/S 期。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）通过胸腺嘧啶核苷双阻断法 (2 nM, 16 hr) 进行 S 期同步，之后在指定时间内释放到新鲜培养基的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Cyclin E1 (D7T3U) Rabbit mAb#8457 （上）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #（下），对未经处理 (-) 或经阿非迪霉素（10ng/ml；24小时；+）的 HT-29 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    对经 aphidicolin 处理（10 μg/ml，24 小时）的 HT-29 细胞提取物胸苷激酶 1 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb。使用 Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb 进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb 对未经处理或经羟基脲处理 20 小时的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    对 293T 细胞提取物 Geminin 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb。使用进行蛋白质印迹分析。

    Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。

    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP® Rabbit mAb (绿色)，对有丝分裂的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 CDT1 (D10F11) Rabbit mAb 对 HeLa 细胞的 CDT1 进行免疫沉淀。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。泳道 1 是 10% 输入对照。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5®#4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb（绿色）对野生型（左图，阳性）或胸苷激酶 1 敲除型（右图，阴性）HCT 116 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 293T 细胞沉淀物（左图，高表达）或 SK-MEL-28 细胞沉淀物（右图，低表达）进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-Histone H3 (Ser10) (D7N8E) XP®Rabbit mAb 和 propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087，对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析，以检测 DNA 含量。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 CDT1 (D10F11) Rabbit mAb（绿色）对 HT-29 和 HUVEC 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Thymidine Kinase 1 (E2H7Z) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对野生型（蓝色，阳性）或胸苷激酶 1 敲除型（绿色，阴性）HCT 116 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    对用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（绿色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（红色）标记的非同步 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    培养 Hela 细胞后，不经处理 (左小图) 或经 Nocodazole＃2190(100ng/ ml，16小时，右小图) 处理。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对交联染色质和磷酸组蛋白 H3 (Ser10)(D7N8E) XP® Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human GAPDH Promoter Primers #4471和 SimpleChIP® Human γ-Actin Promoter Primers #5037，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（左图）作为对照，使用 Cyclin B1 (D5C10) XP® Rabbit mAb（右图）和 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人食管癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的人子宫内膜样腺癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb（右图）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（左图）和共同染色的 Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087 对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺腺癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金氏淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 34 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性癌进行免疫组织化学分析。
    Cell Cycle Phase Determination Antibody Sampler Kit: Image 35 Expand Image
    使用 Geminin (E5Q9S) XP® Rabbit mAb（绿色）对 Hep G2 细胞（左图）和 SK-MEL-28 细胞（右图）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
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