Revision 1

#9328Store at -20C

1 个试剂盒

(9 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
c-Fos Antibody 4384 20 µl 62 kDa Rabbit 
c-Abl Antibody 2862 20 µl 135 (c-Abl); 210 (Bcr-Abl) kDa Rabbit 
c-Jun (60A8) Rabbit mAb 9165 20 µl 43, 48 kDa Rabbit IgG
c-Kit (D13A2) XP® Rabbit mAb 3074 20 µl 120 and 145 kDa Rabbit 
c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 5605 20 µl 57-65 kDa Rabbit IgG
c-Raf Antibody 9422 20 µl 65 to 75 kDa Rabbit 
Ras (27H5) Rabbit mAb 3339 20 µl 21 kDa Rabbit IgG
Src (32G6) Rabbit mAb 2123 20 µl 60 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
c-Rel (D4Y6M) Rabbit mAb 12707 20 µl 68-78 kDa Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The c-Oncogene Antibody Sampler Kit provides an economical means of evaluating total levels of various oncogenic proteins. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two Western blot experiments.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The regulation of cell growth, differentiation and programmed death is coordinated by several sets of proteins that comprise essential signal transduction pathways. Many of these key regulatory proteins are encoded by proto-oncogenes, which can be activated (altered) to change the typical cell program to one of abnormal cell growth and unregulated development. Proteins encoded by proto-oncogenes include growth factors and other ligands, receptor proteins, tyrosine kinases, various regulatory proteins (i.e. GTPases) and transcription factors. Together these proteins comprise the basic elements of cell signaling pathways; altered expression or mutation of one or more of these components can lead to oncogenic growth (reviewed in 1).
Non-receptor (i.e. cytoplasmic, nuclear) tyrosine kinases such as c-Abl and Src play key roles in the regulation of cell proliferation, differentiation, apoptosis, cell adhesion and stress responses (2,3). Alteration of the corresponding c-Abl and Src proto-oncogenes is associated with oncogenesis; Abl1-BCR gene translocations result in chronic myelogenous leukemia (CML) while constitutively active Src is seen in some patients with colon cancer and altered Src expression is seen in a wide array of cancers (2,4). Regulation of Raf tyrosine kinase by Ras GTPase controls downstream kinases in the MEK/MAPK signaling pathway (5). Activation of the Ras and Raf proto-oncogenes are common in human cancers and both proteins are seen as potential therapeutic targets (6). The receptor tyrosine kinase c-Kit plays a critical role in activation and growth of hematopoietic stem cells (7); mutations that inhibit c-Kit kinase activity are associated with a variety of developmental disorders while mutations producing constitutively active c-Kit can result in mastocytosis and gastrointestinal stromal tumors (8). The alteration of key transcription factors such as c-Fos, c-Jun, c-Myc and c-Rel that are normally responsible for regulating cell and tissue growth, differentiation and the inflammation/immune response, can also result in unregulated, oncogenic cell growth (9-12).

  1. Croce, C.M. (2008) N Engl J Med 358, 502-11.
  2. Wang, J.Y. (2000) Oncogene 19, 5643-50.
  3. Thomas, S.M. and Brugge, J.S. (1997) Annu Rev Cell Dev Biol 13, 513-609.
  4. Dehm, S.M. and Bonham, K. (2004) Biochem Cell Biol 82, 263-74.
  5. Avruch, J. et al. (1994) Trends Biochem Sci 19, 279-83.
  6. Stites, E.C. et al. (2007) Science 318, 463-7.
  7. Gommerman, J.L. et al. (1997) J Biol Chem 272, 30519-25.
  8. Nocka, K. et al. (1990) EMBO J 9, 1805-13.
  9. Milde-Langosch, K. (2005) Eur J Cancer 41, 2449-61.
  10. Shaulian, E. and Karin, M. (2002) Nat Cell Biol 4, E131-6.
  11. Yokota, J. et al. (1986) Science 231, 261-5.
  12. Rayet, B. and Gélinas, C. (1999) Oncogene 18, 6938-47.

Background References

    Trademarks and Patents

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    Revision 1
    #9328

    c-Oncogene Antibody Sampler Kit

    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from K-562 cells using c-Abl Antibody #2862. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:50 和 1:250 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 66-440 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb #5605 对 Raji 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:50(蓝线)和 1:250(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image

    使用  c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165 对经过紫外线(100 mJ/cm2;恢复 2 小时)处理的 HeLa 细胞裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from HeLa cells serum starved for 24hr and treated with TPA (400nM, 4hr) using c-Raf Antibody #9422. 虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 c-Rel (D4Y6M) Rabbit mAb,对来自不同细胞系和组织的提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Src (32G6) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 c-Abl Antibody 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 c-Kit (D13A2) XP® Rabbit mAb 对 NCI-H526 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Ras (27H5) Rabbit mAb 对来自 293T、C2C12 和 C6 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 c-Fos Antibody,对血清饥饿过夜后并用 TPA 刺激 4 小时的 HeLa、RAW 和 H-4-IIE 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb Antibody, #5605 (上图)或β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970(下图)对对照 HEK293 细胞(泳道 1)或 c-Myc 敲除型 HEK293 细胞(泳道2)提取物进行蛋白质印迹法分析。c-Myc 敲除型 HEK293 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Myc 的特异性。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165对对照型 HeLa 细胞 (lane 1) 或 c-Jun 敲除型 HeLa 细胞 (lane 2) 的提取物进行蛋白印迹分析。c-Jun 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Jun 的特异性。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 c-Raf Antibody #9422对未处理的或经 TPA 处理(200 nM,30 分钟)的 HeLa、C2C12 或 PC12 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 c-Rel (D4Y6M) Rabbit mAb(上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下),对用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-)、SignalSilence® c-Rel siRNA I (Mouse Specific) #13058 (+) 或 SignalSilence® c-Rel siRNA II (Mouse Specific) #13170 (+) 转染的 Neuro-2a 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。c-Rel (D4Y6M) Rabbit mAb 可证实 c-Rel 表达沉默,而使用 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb 作为上样对照。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 c-Kit (D13A2) XP® Rabbit mAb(绿色)对 NCI-H526(左)和 Jurkat(右)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对转染空载或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染的 Hela 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对未经和已经 UV 处理的 NIH/3T3 和 SK-N-MC 细胞提取物进行进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类星形细胞瘤进行免疫组织化学分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 c-Myc (D84C12) Rabbit mAb(绿色)对转染空载(左图)或经 SignalSilence® c-Myc siRNA I #6341 转染(右图)的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 DY-554 Phalloidin(红色)标记。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类卵巢癌进行免疫组织化学分析。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(绿色)对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。图片中显示 Dclk1 内结合,而 Dclk1 是已知的 c-Jun 靶标基因(请参阅含有 ChIP-qPCR 数据的附图)。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在染色体2(上图)内的结合,包括 c-Jun 的已知靶标基因 Dclk1(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    c-Oncogene Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对饥饿过夜后以 β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Rat CCRN4L Promoter Primers #7983、rat DCLK1 promoter primers 和 SimpleChIP® Rat GAPDH Promoter Primers #7964,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。