Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P05412

Entrez-Gene Id:

3725

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 2361 100 µl H M R 48 Rabbit IgG
c-Jun (60A8) Rabbit mAb 9165 100 µl H M R Mk 43, 48 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

c-Jun is a member of the Jun family containing c-Jun, JunB, and JunD, and is a component of the transcription factor activator protein-1 (AP-1). AP-1 is composed of dimers of Fos, Jun, and ATF family members and binds to and activates transcription at TRE/AP-1 elements (reviewed in 1). Extracellular signals, including growth factors, chemokines, and stress, activate AP-1-dependent transcription. The transcriptional activity of c-Jun is regulated by phosphorylation at Ser63 and Ser73 through SAPK/JNK (reviewed in 2). Knockout studies in mice have shown that c-Jun is essential for embryogenesis (3), and subsequent studies have demonstrated roles for c-Jun in various tissues and developmental processes, including axon regeneration (4), liver regeneration (5), and T cell development (6). AP-1 regulated genes exert diverse biological functions, including cell proliferation, differentiation, and apoptosis, as well as transformation, invasion and metastasis, depending on cell type and context (7-9). Other target genes regulate survival, as well as hypoxia and angiogenesis (8,10). Research studies have implicated c-Jun as a promising therapeutic target for cancer, vascular remodeling, acute inflammation, and rheumatoid arthritis (11,12).

  1. Jochum, W. et al. (2001) Oncogene 20, 2401-12.
  2. Davis, R.J. (2000) Cell 103, 239-52.
  3. Hilberg, F. et al. (1993) Nature 365, 179-81.
  4. Raivich, G. et al. (2004) Neuron 43, 57-67.
  5. Behrens, A. et al. (2002) EMBO J 21, 1782-90.
  6. Riera-Sans, L. and Behrens, A. (2007) J Immunol 178, 5690-700.
  7. Leppä, S. and Bohmann, D. (1999) Oncogene 18, 6158-62.
  8. Shaulian, E. and Karin, M. (2002) Nat Cell Biol 4, E131-6.
  9. Weiss, C. and Bohmann, D. (2004) Cell Cycle 3, 111-3.
  10. Karamouzis, M.V. et al. (2007) Mol Cancer Res 5, 109-20.
  11. Kim, S. and Iwao, H. (2003) J Pharmacol Sci 91, 177-81.
  12. Dass, C.R. and Choong, P.F. (2008) Pharmazie 63, 411-4.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

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    Revision 1
    #8221

    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet

    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 1 Expand Image

    使用  c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165 对经过紫外线(100 mJ/cm2;恢复 2 小时)处理的 HeLa 细胞裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb(上)或 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165(下),对未经或经茴香霉素处理的 C6 细胞提取物;或者,对未经或经紫外线处理的 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165对对照型 HeLa 细胞 (lane 1) 或 c-Jun 敲除型 HeLa 细胞 (lane 2) 的提取物进行蛋白印迹分析。c-Jun 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Jun 的特异性。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    在对照肽(左)或 Phospho-c-Jun (Ser63) II Blocking Peptide (#1020)(右)存在的情况下,使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对未经和已经 UV 处理的 NIH/3T3 和 SK-N-MC 细胞提取物进行进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对未经(左)或经(右)lambda 磷酸酶处理的石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类星形细胞瘤进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌(显示胞核定位)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞聚合体(对照[左]或经茴香霉素处理过[右])进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类卵巢癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类皮肤(通常紧邻血管瘤)进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(绿色)对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 14 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。图片中显示 Dclk1 内结合,而 Dclk1 是已知的 c-Jun 靶标基因(请参阅含有 ChIP-qPCR 数据的附图)。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在染色体2(上图)内的结合,包括 c-Jun 的已知靶标基因 Dclk1(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
    PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet: Image 17 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对饥饿过夜后以 β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Rat CCRN4L Promoter Primers #7983、rat DCLK1 promoter primers 和 SimpleChIP® Rat GAPDH Promoter Primers #7964,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。