Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P05412

Entrez-Gene Id:

3725

Product Information

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb detects endogenous levels of c-Jun only when phosphorylated at Ser63. Phospho-c-Jun (Ser73) Antibody detects endogenous levels of c-Jun only when phosphorylated at Ser73. This antibody also recognizes phosphorylation of JunD at Ser100. c-Jun (60A8) Rabbit mAb detects endogenous levels of total c-Jun protein.

Source / Purification

Phospho-specific polyclonal antibodies are produced by immunizing rabbits with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser63 or Ser73 of human c-Jun, and purified by protein A and peptide affinity chromatography. Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to the amino-terminal of human c-Jun.

Product Description

The PhosphoPlus (R) c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit provides reagents and controls for rapid analysis of c-Jun phosphorylation status.
MW (kDa) 43, 50

Background

c-Jun is a member of the Jun family containing c-Jun, JunB, and JunD, and is a component of the transcription factor activator protein-1 (AP-1). AP-1 is composed of dimers of Fos, Jun, and ATF family members and binds to and activates transcription at TRE/AP-1 elements (reviewed in 1). Extracellular signals, including growth factors, chemokines, and stress, activate AP-1-dependent transcription. The transcriptional activity of c-Jun is regulated by phosphorylation at Ser63 and Ser73 through SAPK/JNK (reviewed in 2). Knockout studies in mice have shown that c-Jun is essential for embryogenesis (3), and subsequent studies have demonstrated roles for c-Jun in various tissues and developmental processes, including axon regeneration (4), liver regeneration (5), and T cell development (6). AP-1 regulated genes exert diverse biological functions, including cell proliferation, differentiation, and apoptosis, as well as transformation, invasion and metastasis, depending on cell type and context (7-9). Other target genes regulate survival, as well as hypoxia and angiogenesis (8,10). Research studies have implicated c-Jun as a promising therapeutic target for cancer, vascular remodeling, acute inflammation, and rheumatoid arthritis (11,12).

  1. Jochum, W. et al. (2001) Oncogene 20, 2401-12.
  2. Davis, R.J. (2000) Cell 103, 239-52.
  3. Hilberg, F. et al. (1993) Nature 365, 179-81.
  4. Raivich, G. et al. (2004) Neuron 43, 57-67.
  5. Behrens, A. et al. (2002) EMBO J 21, 1782-90.
  6. Riera-Sans, L. and Behrens, A. (2007) J Immunol 178, 5690-700.
  7. Leppä, S. and Bohmann, D. (1999) Oncogene 18, 6158-62.
  8. Shaulian, E. and Karin, M. (2002) Nat Cell Biol 4, E131-6.
  9. Weiss, C. and Bohmann, D. (2004) Cell Cycle 3, 111-3.
  10. Karamouzis, M.V. et al. (2007) Mol Cancer Res 5, 109-20.
  11. Kim, S. and Iwao, H. (2003) J Pharmacol Sci 91, 177-81.
  12. Dass, C.R. and Choong, P.F. (2008) Pharmazie 63, 411-4.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

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PhosphoPlus is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#9260

PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit

PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 1 Expand Image

使用  c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165 对经过紫外线(100 mJ/cm2;恢复 2 小时)处理的 HeLa 细胞裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。

PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 2 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb(上)或 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165(下),对未经或经茴香霉素处理的 C6 细胞提取物;或者,对未经或经紫外线处理的 293 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 3 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb(上)或 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165(下),对未经或经紫外线处理的 NIH/3T3 或 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 4 Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对饥饿过夜且经过Human β-Nerve Growth Factor (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞 和 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在 Phospho-c-Jun 的已知靶基因 Lmna 内的结合(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 5 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 6 Expand Image
一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 7 Expand Image
使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165对对照型 HeLa 细胞 (lane 1) 或 c-Jun 敲除型 HeLa 细胞 (lane 2) 的提取物进行蛋白印迹分析。c-Jun 敲除型 HeLa 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 c-Jun 的特异性。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 8 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb #3270(上图)和 c-Jun (60A8) Rabbit mAb #9165 (下图),对 c-Jun 对照细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 9 Expand Image
在对照肽(左)或 Phospho-c-Jun (Ser63) II Blocking Peptide (#1020)(右)存在的情况下,使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
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使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类乳腺癌(对照[左]或经 lambda 磷酸酶处理[右])进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 11 Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对饥饿过夜且经过Human β-Nerve Growth Factor (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞 和 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在染色体 2(上图)内的结合,包括 Phospho-c-Jun 的已知靶基因 Lmna(下图)(参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 12 Expand Image
使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对未经和已经 UV 处理的 NIH/3T3 和 SK-N-MC 细胞提取物进行进行蛋白质印迹分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 13 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对未经(左)或经(右)lambda 磷酸酶处理的石蜡包埋的人类乳腺癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 14 Expand Image
在对照肽(左)或 Phospho-c-Jun (Ser73) 封闭肽(右)存在的情况下,使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 15 Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对饥饿过夜且经过Human β-Nerve Growth Factor (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞 和 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 检测。使用 rat Lmna promoter primer、rat Cic intron 1 primer 和 rat Phf17 promoter primer,通过实时 PCR 定量富集 DNA。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
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使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类星形细胞瘤进行免疫组织化学分析。
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使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌(显示胞核定位)进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 18 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类肺癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 19 Expand Image
使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类结肠癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 20 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞聚合体(对照[左]或经茴香霉素处理过[右])进行免疫组织化学分析。
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使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb #3270(绿色)对未经处理(左图)或经过 λ-磷酸酶(右图)处理的小鼠小肠进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。样品用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961(蓝色)封装。
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使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类卵巢癌进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 23 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人类皮肤(通常紧邻血管瘤)进行免疫组织化学分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 24 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经(左)或经 anisomycin(右)处理的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记(红色)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 25 Expand Image
使用 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb 对未经(蓝色)或经紫外线(绿色)处理的 HeLa 细胞进行流式细胞分析。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 26 Expand Image
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对饥饿过夜并用人源 β-神经生长因子 (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞的交联染色质与 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® 兔单克隆抗体 或 c-Jun (60A8) 兔单克隆抗体 #9165 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。结果图显示在磷酸化 c-Jun 和 c-Jun 的已知靶基因 Dclk1 内结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。欲知其他 ChIP-seq 情况,请下载产品说明书。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 27 Expand Image
使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(绿色)对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 28 Expand Image
使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒(磁珠法) #9005 对饥饿过夜并用人源 β-神经生长因子 (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞的交联染色质与 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® 兔单克隆抗体 或 c-Jun (60A8) 兔单克隆抗体 #9165 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 2(上图)内的结合,包括 Phospho-c-Jun 和 c-Jun 的已知靶标基因 Dclk1(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 29 Expand Image
以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)作为对照,使用 c-Jun (60A8) Rabbit mAb(实线)对 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 30 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对过夜饥饿并经过 Human β-Nerve Growth Factor (hβ-NGF) #5221 (50 ng/ml) 处理 2 小时的细胞交联染色质,在加入 Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb or Normal Rabbit IgG #2729 后,进行染色质免疫沉淀法分析。使用大鼠 CCRN4L Promoter Primers #7983、大鼠 DCLK1 promoter primers 和 SimpleChIP® Rat GAPDH Promoter Primers #7964,通过实时 RCR SimpleChIP®对富集的 DNA 进行量化。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 31 Expand Image
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。图片中显示 Dclk1 内结合,而 Dclk1 是已知的 c-Jun 靶标基因(请参阅含有 ChIP-qPCR 数据的附图)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 32 Expand Image
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对饥饿过夜后以β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在染色体2(上图)内的结合,包括 c-Jun 的已知靶标基因 Dclk1(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) and c-Jun (Ser73) Antibody Kit: Image 33 Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003,对饥饿过夜后以 β-NGF #5221 (50ng/ml) 处理 2 小时的 PC-12 细胞中提取的交联染色质,在加入 c-Jun (60A8) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Rat CCRN4L Promoter Primers #7983、rat DCLK1 promoter primers 和 SimpleChIP® Rat GAPDH Promoter Primers #7964,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。