Revision 1

#82970Store at -20C

1 个试剂盒

(3 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 13440 20 µl 200 kDa Rabbit IgG
BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb 20696 20 µl 105 kDa Rabbit IgG
BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb 83375 20 µl 200, 110 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

The BRD4 Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting various BRD4 isoforms. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Bromodomain-containing protein 4 (BRD4) is a member of the bromodomains and extra terminal (BET) family of proteins, which also includes BRD2, BRD3, and BRDT (1-3). BET family proteins contain two tandem bromodomains and an extra terminal (ET) domain, and bind acetyl lysine residues (3). BRD4 is a chromatin-binding protein with a preference for Lys14 on histone H3 as well as Lys5 and Lys12 on histone H4 (4). BRD4 chromatin binding occurs throughout the cell cycle, including condensed mitotic chromosomes, when the majority of genes are silenced (5). BRD4 association with chromatin during mitosis is thought to be an important part of the bookmarking mechanism to accelerate re-activation of the silenced genes upon exit from mitosis (2,6). BRD4 has been shown to facilitate transcription by recruiting the positive transcription elongation factor b (pTEFb) complex that phosphorylates Ser2 of the heptapeptide repeat of the carboxy-terminal domain of RNA polymerase II, promoting transcription elongation (3,7,8). In addition, BRD4 has been found to be part of the super elongation complex and the polymerase associated factor complex (PAFc) in MLL-fusion derived leukemia cell lines, demonstrating a role for BRD4 in the regulation of transcription elongation (9). Research studies have shown that BRD4 (and BET family proteins) may be promising therapeutic targets for various Myc-driven cancers, such as Burkitt’s lymphoma and certain acute myeloid leukemias (1,10,11). Investigators have found molecular inhibition of BET proteins to be effective in inducing apoptosis in various MLL-fusion driven leukemic cell lines by competing BRD3 and BRD4 from chromatin, leading to reduced expression of Bcl-2, Myc, and CDK6 (9). BET inhibition has also been shown to have antitumor activities against nuclear protein in testis (NUT) midline carcinoma cell lines and xenografts in mice where BRD4 is found to be a frequent translocation partner of the NUT protein (12). In addition, BRD4 regulates the expression of some inflammatory genes, and inhibition of BRD4 (and BET family proteins) chromatin binding causes reduced expression of a subset of inflammatory genes in macrophages, leading to protection against endotoxic shock and sepsis (13).

The expression of BRD4 isoform C, also known as the short isoform (BRD4-S), is similar to the long isoform (BRD4-L). The balance of expression between the two isoforms has been shown to contribute to disease states, where BRD4-S has shown to be oncogenic in a few contexts (14-16). BRD4-S is the predominant isoform that binds to modified histones and has a stronger affinity than BRD4-L (17,18). BRD4-S also plays a role in DNA damage, where it recruits the condensin II complex to enhance DNA damage induced cell death (18).

  1. Belkina, A.C. and Denis, G.V. (2012) Nat Rev Cancer 12, 465-77.
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  14. Wu, S.Y. et al. (2020) Mol Cell 78, 1114-1132.e10.
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  17. Wang, R. et al. (2012) J Biol Chem 287, 10738-52.
  18. Han, X. et al. (2020) Nat Struct Mol Biol 27, 333-341.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #82970

    BRD4 Antibody Sampler Kit

    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Enhanced cross-linking and immunoprecipitation (eCLIP) was performed with RNA from K-562 cells and BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb using a protocol based on the RBP-eCLIP method from Eclipsebio. 该图显示结合作用遍及 TBCD 转录。数据由 Gene Yeo 博士的实验室友情提供，并经许可使用。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    对来自 293T 细胞提取物的 BRD4 同工型 C 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb。使用 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb（绿色）、DyLight 650 Phalloidin #12956（红色）和 DAPI #4083（蓝色）对空载转染（左图，高表达）或经针对 BRD4 的 siRNA（右图，低表达）转染的 HCT 116 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 ，以来自 MV-4-11 细胞的交联染色质和 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 human BCL2 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers #14905 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 对 RL、293T 和 Jurkat 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb（上图）和 DYKDDDDK Tag (D6WB) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) #14793（下图）对转染空载 (-) 或转染带 Myc/DDK 标签的全长人 BRD4 IsoB 蛋白 (hBRD4IsoB-Myc/DDK) 或带 Myc/DDK 标签的全长人 BRD4 IsoC 蛋白 (hBRD4IsoC-Myc/DDK) 的表达载体的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 MV-4-11 细胞的交联染色质与 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在 CCDC26 基因内的结合。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb（泳道3）对来自 RL 细胞提取物的 BRD4 进行免疫沉淀分析。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对经对照 siRNA (-) 或人 BRD4 同工型 C siRNA (hBRD4 Isoform C siRNA; +)转染 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb（上图）或 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对转染空载或转染带 BRD4 siRNA 的 293T 细胞提取物和 Jurkat、Caki-1 和 NIH/3T3 的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。按预期，在转染带 BRD4 siRNA 的 293T 细胞中观察到降低信号。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对未经处理的 MV-4-11 细胞的交联染色质与 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示在染色体 8（上图）内的结合，包括 CCDC26 基因（下图）。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb（上图）或 BRD4 Rabbit mAb（下图）对石蜡包埋的扁桃体人类鳞状细胞癌细胞（左图）、正常肾脏（中图）或正常前列腺（右图）进行免疫组织化学分析。这两种抗体可检测人 BRD4 上独特的非重叠表位。使用两种抗体获得的相似染色模式有助于确认染色特异性。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 BRD4 Isoform C (E1Q9N) Rabbit mAb（上图）或 DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb #14793（下图），对空载转染 (-) 或经表达 Myc/DDK 标记的全长人 BRD4 同工型 B (BRD4 Isoform B-Myc/DDK) 或 Myc/DDK 标记的全长人 BRD4 同工型 C (BRD4 Isoform C-Myc/DDK) 的构建体转染 (+) 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    对 293T 细胞提取物 BRD4 蛋白进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb。使用 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对 MV-4-11 细胞的交联染色质与 BRD4 (pan) (E1Y1P) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers #14905、SimpleChIP® Human Bcl-2 Promoter Primers #12924 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）作为对照，使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的人类大细胞神经内分泌癌细胞进行免疫组织化学分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 对石蜡包埋的正常人胰腺细胞进行免疫组织化学分析。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 MV-4-11 细胞中提取的交联染色质，在加入 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀法分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示了 MYC 内结合，MYC 是一种已知的 BRD4 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。如需了解其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 MV-4-11 细胞中提取的交联染色质，在加入 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀法分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 8（上图）内的结合，包括 MYC 的已知靶基因 BRD4（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 -4-11 细胞中提取的交联染色质，在加入 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human Bcl-2 Promoter Primers #12924、human c-Myc intron 1 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过 MV-4-11 细胞和 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 BRD4 的已知靶标基因 TEME53 基因内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过 MV-4-11 细胞和 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 检测。‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 BRD4 的已知靶基因 LINC01132 基因（上图）和 TEME53 基因（下图）处结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    BRD4 Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，通过€‚ MV-4-11 细胞和 BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb or Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 检测。使用人 TMEM53 内含子 1 引物和人 TBX15 下游引物通过实时 PCR 定量富集的 DNA。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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