Revision 12
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S, IP, IHC-Bond, IHC-P, IF-F, IF-IC, FC-FP, ChIP, ChIP-seq, C&R

REACTIVITY:

H M R Mk

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

92

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P35222

Entrez-Gene Id:

1499

Product Information

Product Usage Information

For optimal ChIP and ChIP-seq results, use 20 μl of antibody and 10 μg of chromatin (approximately 4 x 106 cells) per IP. This antibody has been validated using SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kits.

The CUT&RUN dilution was determined using CUT&RUN Assay Kit #86652.
Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:10 - 1:50
Immunoprecipitation 1:50
IHC Leica Bond 1:50 - 1:200
Immunohistochemistry (Paraffin) 1:50 - 1:200
Immunofluorescence (Frozen) 1:50 - 1:100
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:100 - 1:400
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50 - 1:100
Chromatin IP 1:25
Chromatin IP-seq 1:25
CUT&RUN 1:25

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

For a carrier free (BSA and azide free) version of this product see product #84441.

Specificity / Sensitivity

β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total β-catenin protein.

Species Reactivity:

Human, Mouse, Rat, Monkey

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Zebrafish, Bovine, Pig, Horse, Guinea Pig

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Pro714 of human β-catenin protein.

Background

β-catenin is a key downstream effector in the Wnt signaling pathway (1). It is implicated in two major biological processes in vertebrates: early embryonic development (2) and tumorigenesis (3). CK1 phosphorylates β-catenin at Ser45. This phosphorylation event primes β-catenin for subsequent phosphorylation by GSK-3β (4-6). GSK-3β destabilizes β-catenin by phosphorylating it at Ser33, Ser37, and Thr41 (7). Mutations at these sites result in the stabilization of β-catenin protein levels and have been found in many tumor cell lines (8).

  1. Cadigan, K.M. and Nusse, R. (1997) Genes Dev 11, 3286-3305.
  2. Wodarz, A. and Nusse, R. (1998) Annu Rev Cell Dev Biol 14, 59-88.
  3. Polakis, P. (1999) Curr Opin Genet Dev 9, 15-21.
  4. Amit, S. et al. (2002) Genes Dev 16, 1066-76.
  5. Liu, C. et al. (2002) Cell 108, 837-47.
  6. Yanagawa, S. et al. (2002) EMBO J 21, 1733-42.
  7. Yost, C. et al. (1996) Genes Dev 10, 1443-54.
  8. Morin, P.J. et al. (1997) Science 275, 1787-90.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™ IP: Immunoprecipitation IHC-Bond: IHC Leica Bond IHC-P: Immunohistochemistry (Paraffin) IF-F: Immunofluorescence (Frozen) IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) ChIP: Chromatin IP ChIP-seq: Chromatin IP-seq C&R: CUT&RUN

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SignalStain is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
SimpleChIP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 12
#8480

β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480(上图)或 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457(下图)对对照 HeLa 细胞(泳道 1)或 β-Catenin编码基因出现明显框内截短突变的 HeLa 细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白印迹分析。突变 HeLa 细胞中 β-Catenin分子量的变化与框内缺失一致。
Western Blotting Image 2: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
Western Blotting Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Immunoprecipitation Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
对 HeLa 细胞提取物中的 β-Catenin 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input,泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀,泳道 3 为 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480。使用 β-Catenin (15B8) Mouse mAb #37477 进行蛋白质印迹法分析。
Immunohistochemistry Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
在 Leica® BOND Rx 上使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 2: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
在 Leica® BOND Rx 上使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
在 Leica® BOND Rx 上,使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。

Immunohistochemistry Image 2: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 3: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 4: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 5: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 6: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
在对照肽(左图)或抗原特异性肽(右图)存在的情况下,使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠细胞进行免疫组织化学分析。
Immunohistochemistry Image 7: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HeLa(左图)或 NCI-H28(右图)细胞团进行免疫组织化学分析。
Immunofluorescence Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb(绿色)对小鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin(红色)标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Immunofluorescence Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb(绿色)对 HeLa(左图)和 NCI-H28(右图)细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
Flow Cytometry Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit Isotype Control #3900(虚线)对 NCI-H28 细胞(绿色)和 Hela 细胞(蓝色)进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
Chromatin Immunoprecipitation Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 HCT116 细胞中提取的交联染色质,在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb #8814 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示整个 AXIN2(β-Catenin的一个已知靶基因)范围内的结合作用(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图)。
Chromatin Immunoprecipitation Image 2: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005,对 HCT116 细胞中提取的交联染色质,在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb #8814 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 17(上图)内的结合,包括 β-Catenin 的已知靶标基因 AXIN2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
Chromatin Immunoprecipitation Image 3: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 HCT 116 细胞的交联染色质,在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀法分析。使用 SimpleChIP®Human Axin2 Intron 1 Primers #8973、SimpleChIP®Human CaMK2D Intron 3 Primers #5111、human c-Myc promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。
CUT and RUN Image 1: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在 β-Catenin 的已知靶基因 Axin2 内的结合(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
CUT and RUN Image 2: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在染色体 17(上图)内的结合,包括 β-Catenin 的已知靶标基因 Axin2(下图)(参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图)。
CUT and RUN Image 3: β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb Expand Image
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652,对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP ® Human Axin2 Intron 1 Primers #8973、SimpleChIP® Human CaMK2D Intron 3 Primers #5111和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486,通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量(等于 1)的信号。