Revision 6

#9930Store at -20C

1 个试剂盒

(8 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb 14220 20 µl 35, 19, 17 kDa Rabbit IgG
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 9664 20 µl 17, 19 kDa Rabbit IgG
Caspase-8 Antibody 4927 20 µl 45, 57 kDa Rabbit 
Cleaved Caspase-8 (Asp387) (D5B2) XP® Rabbit mAb 8592 20 µl 18, 43 kDa Rabbit IgG
Caspase-9 Antibody 9504 20 µl 37, 39, 49 kDa Rabbit 
Cleaved Caspase-9 (Asp353) Antibody 9509 20 µl 37 kDa Rabbit 
Cleaved PARP (Asp214) (7C9) Mouse mAb 9548 20 µl 89 kDa Mouse IgG2b
Caspase-12 (E9T3W) Rabbit mAb 58208 20 µl 55, 38, 28 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Specific) is designed for use with mouse samples and offers an economical means to evaluate the levels of active and inactive caspases. The kit contains enough primary and secondary antibodies to perform two Western blot experiments with each antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Apoptosis is a regulated physiological process leading to cell death. Caspases, a family of cysteine acid proteases, are central regulators of apoptosis. Initiator caspases (including 8, 9, 10, and 12) are closely coupled to proapoptotic signals. Once activated, these caspases cleave and activate downstream effector caspases (including 3, 6, and 7), which in turn cleave cytoskeletal and nuclear proteins like PARP, α-fodrin, DFF, and lamin A and induce apoptosis. Cytochrome c released from mitochondria is coupled to the activation of caspase-9, a key initiator caspase (1). Proapoptotic stimuli include FasL, TNF-α, DNA damage and ER stress. Fas and TNFR activate caspase-8 and -10 (2), DNA damage leads to the activation of caspase-9 and ER stress leads to the calcium-mediated activation of caspase-12 (3). The inhibitor of apoptosis protein (IAP) family includes XIAP and survivin and functions by binding and inhibiting several caspases (4,5). Smac/Diablo, a mitochondrial protein, is released into the cytosol upon mitochondrial stress and competes with caspases for binding of IAPs. The interaction of Smac/Diablo with IAPs relieves the inhibitory effects of IAPs on caspases (6).

  1. Baker, S.J. and Reddy, E.P. (1998) Oncogene 17, 3261-3270.
  2. Budihardjo, I. et al. (1999) Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15, 269-290.
  3. Nakagawa, T. et al. (2000) Nature 403, 98-103.
  4. Deveraux, Q. L. et al. (1998) EMBO J. 17, 2215-2223.
  5. Li, F. et al. (1998) Nature 396, 580-584.
  6. Du, C. et al. (2000) Cell 102, 33-42.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意,否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件,除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受, 否书均被拒书,并且无效。

    专品专有“专供研究使用”的专专或专似的专专声明, 且未专得美国食品和专品管理局或其他外国或国内专管机专专专任何用途的批准、准专或专可。客专不得将任何专品用于任何专断或治专目的, 或以任何不符合专专声明的方式使用专品。CST 专售或专可的专品提供专作专最专用专的客专,且专用于研专用途。将专品用于专断、专防或治专目的, 或专专售(专独或作专专成)或其他商专目的而专专专品,均需要 CST 的专独专可。客专:(a) 不得专独或与其他材料专合向任何第三方出售、专可、 出借、捐专或以其他方式专专或提供任何专品,或使用专品制造任何商专专品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反专专、 反专专专品或以其他方式专专专专专品的基专专专或技专,或使用专品开专任何与 CST 的专品或服专专争的专品或服专, (c) 不得更改或专除专品上的任何商专、商品名称、徽专、专利或版专声明或专专,(d) 只能根据 CST 的专品专售条款和任何适用文档使用专品, (e) 专遵守客专与专品一起使用的任何第三方专品或服专的任何专可、服专条款或专似专专

    Revision 6
    #9930

    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred)

    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 1 Expand Image
    使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220 对经过细胞色素 C 处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 2 Expand Image
    使用 Caspase-12 (E9T3W) Rabbit mAb(上图)、Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb #2278(中图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对转染空载 (-) 或转染 N 末端带有 Myc/DDK 标签的全长小鼠 Caspase-12 (Myc/DDK-mCasp12; +) 表达载体的 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 3 Expand Image
    使用 Caspase-12 (E9T3W) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对未经处理 (-) 或经过细胞色素 c(250 μg/mL,45 分钟;+)和 dATP(2 mM,45 分钟;+)体外处理的 HC11 乳腺上皮细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 4 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb #9664 对经过细胞色素 C 处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像(左图)显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带(如图所示)。对应的电泳图(右图)为一抗稀释比例在 1:10(蓝线)和 1:50(绿线)时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下,使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple(BioTechne 品牌)的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 5 Expand Image
    使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb (上)或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (下)对未处理 (-) 或经 Staurosporine #9953 (1 μM;3小时) 或 Etoposide #2200 (25 μM,过夜) 处理的不同细胞系进行蛋白质印迹分析。MCF7 细胞对 caspase-3 表达呈阴性。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 6 Expand Image
    使用 Caspase-8 Antibody 对 BaF3、Raw264.7 和 C2C12 细胞系的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 7 Expand Image
    使用 Caspase-12 (E9T3W) Rabbit mAb(上图)或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174(下图)对不同细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。J774A.1 细胞中 caspase-12 的阴性表达与预测的表达模式一致。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®,在酶催化分解期间发光。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 9 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后,与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*,它可在酶催化的分解期间发光。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 10 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-8 (Asp387) (D5B2) XP® Rabbit mAb 对空载转染 (-) 或过表达小鼠胱天蛋白酶-8 (mCasp8) 的构建体转染 (+) 的 293T 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 11 Expand Image
    使用 Caspase-9 Antibody 对未经或经星形孢菌素 (1 µM) 或 cytochrome c (0.25 mg/ml) 处理的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。p39:在 Asp368 位点裂解的 caspase-9。p37:在 Asp353 位点裂解的 caspase-9。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 12 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-9 (Asp353) Antibody(上)或 Caspase-9 Antibody #9504(下)对未经或经星形孢菌素处理的 L929 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 13 Expand Image
    使用 Cleaved PARP (Asp214) (7C9) Mouse mAb 对未经处理或经 staurosporine (1 µM) 处理的 NIH/3T3 细胞进行蛋白质印迹法分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 14 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 staurosporine #9953(1uM,3 小时)或 etoposide #2200(25uM,5 小时)处理的 C6(大鼠)、NIH/3T3(小鼠)和 Jurkat(人源)提取物进行蛋白质印迹分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 15 Expand Image
    使用 Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb #14220(上图)和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487(下图)对 HCT116 细胞(泳道 1)或 CASP3 敲除型细胞(泳道 2)的提取物进行蛋白质印迹分析。CASP3 敲除型 HCT116 细胞中没有信号,这证实了该抗体对 CASP3 的特异性。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 16 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-8 (Asp387) (D5B2) XP® Rabbit mAb 对未经处理或经环己酰亚胺(CHX,10 μg/ml,过夜)处理、接着 hTNF-α #8902(20 ng/ml,4 小时)处理的 CTLL-2 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 17 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对未经或经 etoposide(25uM, 5 小时)处理的 Jurkat 细胞的提取物进行免疫沉淀法。使用同一抗体进行蛋白质进行印迹分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 18 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-8 (Asp387) (D5B2) XP® Rabbit mAb(绿色)对未经处理(左图)或经 TNF-α 和环己酰亚胺(20 ng/ml 和2.5 ug/ml,4 小时和 3 小时;右图)处理的 Raw 264.7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 19 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-9 (Asp353) Antibody(绿色)对经过 staurosporine 处理(左图)或未经处理(右图)的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 20 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-8 (Asp387) (D5B2) XP® Rabbit mAb Rabbit mAb(实线)或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900(虚线)对未经处理(蓝色)或经 etoposide #2200(25 μM,过夜;绿色)处理的 A20 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')₂ Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 21 Expand Image
    在对照肽(左)或 Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide (#1050)(右)存在的情况下,使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 22 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 在 SignalSlide® Cleaved Caspase-3 IHC Controls #8104 上对石蜡包埋的未经处理(左图)或经过依托泊苷处理(右图)的 Jurkat 细胞进行免疫组织化学分析。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 23 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb,对石蜡包埋的小鼠胚胎进行免疫组织化学染色,以显示凋亡细胞细胞浆定位。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 24 Expand Image
    使用 Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb(绿色)标记的且未经(左)或经(右)Staurosporine #9953 处理的 HT-29 细胞的共聚焦免疫荧光图像。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin #8953(红色)进行标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084(DNA 荧光染料)。
    Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred): Image 25 Expand Image
    使用与非特异性的阴性对照抗体(红色)作为 Caspase-3(Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 的对照,对未经(蓝色)或已经(绿色)etoposide #2200 处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析。